Как нарисовать рисунки по клеточкам в тетради: Рисунки ручкой по клеточкам в тетради

Рисунок по клеточкам в тетради для начинающих — 100 легких и маленьких рисунков

Есть множество техник рисования. Для освоения одних нужно, как минимум, посещать художественные школы, а как максимум, много-много трудиться, имея недюжинный талант и способности. Для других – просто желание и совсем немного времени. Вот о последнем виде техники мы и поговорим сейчас. Я хочу познакомить вас с клеточным рисунком. Конечно, не все так просто, какие-то усилия нужны для того, чтобы им овладеть. Но так от этого еще интереснее!

Рисунок по клеточкам в тетради для начинающих

Что нужно, чтобы начать обучаться методу рисования по клеткам? Немного времени, желание и чуть-чуть науки. А наука простая, существует всего 2 правила:

1. Для того, чтобы сделать прямые линии по вертикали и горизонтали, нужно зарисовывать или обводить квадратики, которые следуют один за другим.
2. Для угла (вверх или вниз) – зарисовываются клетки по диагонали, те, что касаются друг друга уголками.

Осталось только научиться масштабированию: что-то больше, а значит, линии нужно делать длиннее, что-то меньше – и линии короче.

Но в самом начале на помощь придут уже готовые схемы. Нужно только внимательно изучить образец и повторить его.

Ну нравяться мне котики, поэтому еще вам шаблончик.

Разноцветные лёгкие рисунки по клеточкам для детей 5 лет

Очень интересно и полезно заниматься с детками. А, если мы говорим о рисунке по клеткам, то польза здесь двойная:

1. Мы проводим время с детьми и развиваем их творческие способности.
2. Помогаем карапузам освоиться в направлениях и цифрах. Малыши видят практическое применение того, что они изучали: лево-право, один-два-три.

Начну с самых легких и маленьких шаблонов.

Простой цветочек — орнамент.

Маленькая простая клубничка.

Какже без домика? Самый простой и первый рисунок каждого ребенка это, пожалуй, домик.

Зайчик немного сложнее, но в компании с мамой ребенок справиться легко.

Курочка тоже простая, с ней справиться и сам малыш.

Конечно, сборка в этой категории не сложная. Она по силам карапузам. А благодаря красочности, и тому, что мы охотно помогаем детям во всем разобраться, такие рисунки очень понравятся малышам.

От нас потребуются небольшие усилия. Например, если мы учим кроху рисовать ежика, стоит продумать историю про нашего героя, которая заинтересует ребенка и мотивирует его начать и закончить рисовать картинку.

Черно-белые лёгкие рисунки по клеточкам в тетради для начинающих

Знаете, кажется, что с разными расцветками картинки более четкие. Но вот эта подборка как раз доказывает, что картинки могут быть яркими и в черно-белом исполнении!

Это рисунок для большой тетради, но все же может вам пригодиться ко Дню Космонавтики, к примеру.

Убеждена, что чаще всего такие рисунки делаются простым карандашом или ручкой! А нарисовать можно все! Для начала стоит повторять схемы и освоиться в технике.

А потом и самому создавать узоры.

Представьте, я прямо сейчас проделала маленький трюк:

• Положила ладошку на тетрадный лист и обвела.
• А потом, придерживаясь контуров ладошки, сделала рисунок по клеткам!
• Стерла контурные вспомогательные линии и чуть-чуть подправила…

И получилось очень даже неплохо, немного подработать и будет просто класс! А попробуйте и вы! Или пока тренируйтесь по схемам.

Немного готовых шаблонов для вас:

Черно белый единорог тоже может выглядеть красиво.

Олень или лось? В общем таких рисуют к американскому Новому году.

Инь и янь тоже можно легко нарисовать.

Мне очень нравятся волки и собаки в таком формате.

Миленький серый кролик весьма прост в исполнении. Можно рисовать карандашом с разным количеством наложения слоев.

И невероятно красивая картина, даже не верится, что так просто можно нарисовать лицо.

Легкие и маленькие рисунки по клеточкам в тетради

Картинки не обязательно должны быть большими и сложными. Пусть это будет что-то простое:

• Солнышко;
• Монетка;
• Кактус;
• Бантик;
• Ракета;
• Мороженое и т.д.

 

Есть даже целое направление в графическом, или, как его еще называют, в пиксельном рисунке – Смайлы! Какие разные смайлики могут быть! Они и улыбаются, и печалятся.

Одним словом, вариантов маленьких рисунков огромное количество!!!

Любителям макдональдс посвящается:

Рисунок карандашом по клеточкам в тетради для начинающих

Начинающим помощь в таком деле не помешает. Я с удивлением обнаружила, что рисунки по клеткам еще называют «графический диктант». Оказывается, есть 2 способа выполнения рисунков:

• «Под диктовку», когда кто-то указывает, что и как рисовать. Например: «Зарисуй 2 клетки вниз», «Обведи клетку по вверх и справа.
• По образцу. Когда нужно повторить то, что нарисовано в шаблоне. Для обеих способов подходит клетка в тетради.
• Внимание. Перед началом рисования, посчитайте клеточки на рисунке и в своей тетради, чтобы определить как использовать разворот — по вертикали или по горизонтали. А возможно, понадобиться тетрадь формата А4.

Начну с шаблонов ко Дню Валентина.

Порой можно встретить не схемы, а задания, где есть цифра и стрелка, указывающая направление. Это – подсказка, сколько клеток разукрасить и в какую сторону двигаться.

Еще простые шаблоны к Новому году.

Деда Мороза, к сожалению, не нашла, только Санта Клаус.

И про 23 февраля и день Победы я тоже не забыла. Вот несколько шаблонов.

Огромная звезда — не простой рисунок, но думаю ребенок 10-15 лет справиться!

Кораблики также можно использовать для рисунков на 23 февраля.

И ракета ко Дню космонавтики также просто рисуется.

Еще несколько простых и более сложных цветочков и птичек для открытки на 8 марта.

Красивые рисунки по клеточкам для девочек для личного дневника

Эта категория очень разнообразная. В ней все, что интересует девочек в разном возрасте. Например, можно выбрать схему и повторить ее с разными темами:

• Любимые мультики с красивыми героями. Это и радужные пони, и ученики заколдованной школы мистерия и т.д.

• Куклы. Любимую Барби и ее подружек тоже можно нарисовать.

• А как без няшных котят и мимишных зайчат? (эту тему мы еще затронем чуть дальше).
• Конфеты, пироженки и мороженко. Об этом тоже поговорим более подробно потом, в этом разделе все эти картинки можно найти в любимых розовых оттенках.
• Автопортреты. Да-да! Можно нарисовать и себя!

Девочкам понравится этот раздел, и они будут заглядывать сюда часто за новыми идеями.

Еще несколько орнаментов, которые могут пригодиться для оформления ежедневника.

Замечательный яркий цветок с серединкой инь-янь.

Еще немного смайликов вам в помощь. Их можно использовать для отображения своего настроения.

Рисунки майнкрафт по клеточкам в тетради для мальчиков

Конечно же, я не могла обойти мальчиков и любимую их тематику! Раздел полностью соответствует интересам ребят, которые любят сюжет майнкрафта. Здесь они могут подобрать все, чтобы вспомнить своих любимых героев и их истории. А, может быть, при помощи пиксельной графики мальчики создадут свой сюжет… будем ждать результатов этого творческого процесса!

Больше шаблонов ищите в отдельной статье.

Супергерои по клеточкам в тетради для мальчиков

Еще картинки для мальчиков любимых супергероев, не из майнкрафта правда, но возможно вашим детям захочется нарисовать и их?

Еще мальчишкам могут пригодиться схемы героев звездных войн. Например, принцесса Лея и джедаи.

И, конечно, не обойтись без мастера Йоды.

Всеми любимые роботы — дроиды также адаптировали по клеточкам.

На всякий случай истребитель вам в коллекцию.

И подборка страшных злодеев.

Еще несколько полезных схем для мальчиков постарше, так как они довольно сложные. И посчитайте клеточки, чтобы определить поместится ли рисунок в вашу тетрадь.

Кот Саймон – рисунок по клеточкам

Ну вот мы в самой любимой части арт искусства! Эта категория явно будет интересна всем: мальчикам и девочкам, маленьким и взрослым.

Наша сборка была бы не полной приключений любимого кота Саймона по двум причинам:

1. Этот потешный котик и сам по себе – прекрасный образец (его эмоции можно обыграть в рисунках).
2. Но самое интересное – это переделки, в которых Саймону по собственной вине, приходится оказаться.

И все это есть в коллекции с графическими схемами.

Маленькие и милые животные по клеточкам в тетради

Тут вас ждет очень разнообразная коллекция:

• Можно подобрать няшных животных, выполненных в стиле кавай.
• Но есть и такие рисунки, которые сложно отличить от реальных портретов наших любимцев.
• Есть сложные рисунки, а есть очень простые, для тех, кто только начинает обучаться рисовать по клеткам.

Выбирайте и срисовывайте!

В отдельную коллекцию хочу вынести совят — очень милых и красивых.

Красивый совенок с холодным сердцем.

А этот очень милашный.

А как вам эта парочка влюбленных совят? Отличная картинка ко дню влюбленных.Внимание,рисунок поместится на лист перевернутый горизонтально.

Сложные новые разноцветные рисунки по клеточкам для 10 лет

Пиксельная графика – это не только популярное новейшее искусство, но и задачи, которые следует выполнить ребенку. А для любого обучения важен рост. Вот здесь ребят ждут более сложные задания, выполнять которые им будет интересно и полезно. Не забудьте посчитать клеточки, чтобы рисунок поместился в вашей тетради.

Шикарное перо павлина.

Милый котейка вам в копилку.

Мороженое, еда, фрукты и напитки по клеточкам для новичков

Самый пестрые рисунки конечно же, в этом разделе! Именно здесь и тортик, и вишенка на нем!!!!

И снова в сборке много разных направлений для тех, кто любит сложные варианты, и для тех, кто только учится. Можно поиграть с формами, с расцветками, попробовать свои силы, выполняя небольшие детали.

Очень интересно узнать ваше мнение об этой творческой коллекции. Уверена, у тех, кто пробовал свои силы в пиксель арт, есть свои предложения по поводу пополнения сборки. Не стесняйтесь, показывайте свои работы и делитесь тем, что будет интересно для всех посетителей сайта.

На всякий случай и эту картинку сохраню в колекцию.

На прощание по чашке чая?

А всей коллекцией можно поделиться у себя в соцсетях. Скопируйте ссылку на статью и оставьте приглашение посетить сайт всем своим друзьям!

Какаши Как рисовать по клеточкам Простые рисунки аниме Наруто Kakashi Naruto How to Draw Pixel Art

Как нарисовать по клеткам персонажа аниме Наруто — Какаши. Как рисовать по клеткам просто быстро портрет Какаши из аниме Наруто. Простые красивые рисунки по клеточкам в тетрадке в клетку. Как нарисовать по клеточкам поэтапно простой красивый рисунок в тетради в клетку — Обучение. Простые рисунки для детей. Видео уроки рисования.
Копирование моих рисунков (схем рисунков) и моих видео в коммерческих целях запрещено!
Kakashi Naruto How to Draw Pixel Art. Drawing Pixel Art anime Naruto Kakashi step by step.
I do not authorize the copying of my videos and drawings for commercial purposes or on other channels.
Рисуем красиво в тетради картинки по клеточкам фломастерами и маркерами в стиле Пиксель Арт — обучающее видео. Украшаем тетради, блокноты, личные дневники. Рисунки фломастерами. Нарисованные картинки в тетради в клетку. Что можно нарисовать по клеточкам в тетради, блокноте. Шаблон схема для вязания, вышивки, мозаики, майнкрафт.
На моем канале Pixellenger (Пикселенжер) уже очень много интересных, ярких, простых и не очень простых рисунков по клеточкам — подписывайтесь и нажимайте на колокольчик возле кнопочки подписаться, чтобы не пропускать новые видео !

Скачать и посмотреть рисунки можно на сайте —
Сайт на русском языке — http://www. pixels.icu/
Сайт на английском языке — http://www.forkids.land/pixel-art-pictures/
#Пикселенжер #Pixellenger #поклеткам, #какрисоватьПоКлеточкам , #какнарисовать , #простыерисунки , #поэтапно . #pixelart

How to draw on Pixel Art cells in a cell notebook. Drawing patterns for knitting, embroidery. How to draw a picture.

كيفية الاعتماد على خلايا بكسل الفن في دفتر خلية. رسم أنماط للتريكو والتطريز وماين كرافت. كيفية رسم صورة.

如何在单元格笔记本中绘制像素艺术单元。 编织，刺绣，Minecraft的绘制图案。 如何画画。

ਸੈੱਲ ਨੋਟਬੁੱਕ ਵਿਚ ਪਿਕਸਲ ਆਰਟ ਸੈੱਲਾਂ ‘ਤੇ ਕਿਵੇਂ ਖਿੱਚੀਏ. ਬੁਣਾਈ, ਕroਾਈ, ਮਾਇਨਕਰਾਫਟ ਲਈ ਡਰਾਇੰਗ ਪੈਟਰਨ. ਤਸਵੀਰ ਕਿਵੇਂ ਬਣਾਈਏ.

Cómo dibujar en las celdas de Pixel Art en un cuaderno celular. Patrones de dibujo para tejer, bordar, minecraft. Cómo hacer un dibujo

Como desenhar células Pixel Art em um notebook de célula. Padrões de desenho para tricô, bordado, minecraft. Como desenhar uma imagem.

Рисунки по клеточкам ✍ 100 фото прикольных шаблонов и образцов для рисования по клеточкам маленькие красивые картинки

Каждый из нас хотя бы раз в жизни пробовал себя в роли художника. Для создания своего красочного и неповторимого рисунка нам иногда не хватает умения и фантазии. Нарисовать свой шедевр вам помогут рисунки по клеточкам . Рисовать картинки по клеточкам очень легко и просто, используя тетради в клетку для рисования. С ними можно делать легкие срисовки, составлять красивые и сложные узоры и даже нарисовать портрет человека. Рисунки можно рисовать карандашом или ручкой, в тетради или в блокноте.

Легкие рисунки

Для начинающих можно использовать маленькие рисунки по клеточкам, легкие и красивые. Рисунки для начинающих – это простые незамысловатые картинки с минимумом деталей и цветов. Начиная с легких вариантов, вы узнаете, как рисовать по клеточкам, и сможете быстро освоить эту практику.

Рисунки карандашом

Советуем учиться на небольших картинках, сделанных простым карандашом. Создавайте рисунки по клеточкам в тетради, легкие наброски можно делать с помощью карандаша. Рисунок можно оформить в черно-белой гамме или сделать цветным.

Популярные рисунки

Среди детей и даже взрослых самыми популярными рисунками являются животные. Если вы хотите узнать, как нарисовать по клеточкам милую зверушку или другие популярные картинки, вам пригодятся различные схемы картинок по номерам. Выбирайте и рисуйте понравившиеся картинки по клеточкам в тетради.

Творчество – это так просто

Рисунки по клеткам развивают творческое мышление. Когда мы рисуем по клеточкам, улучшается координация движений при письме, способность концентрации внимания и логика. Кроме того, рисование по клеточкам доставляет массу удовольствия и детям и взрослым, способствует снятию нервного напряжения и улучшает настроение. Стоит попробовать рисовать по клеточкам в тетради, не так ли?

КОТЫ ПО КЛЕТОЧКАМ В ТЕТРАДИ. 36 рисунков

+1

 

Вы тоже любите рисовать картинки по клеточкам? Ищете красивые схемы и картинки по клеткам?

Смотрите нашу фото подборку самых легких и новых рисунков котов, кошек, котят и котиков аниме. Думаем, что вам понравится!

 

Котенок. Маленький рисунок по клеточкам Новые картинки схем котов по клеткам Кошка с сердечком. Рисунки по клеточкам для детей Рисунок по клеточкам в тетради. Мордашка кота

 

Легкие и красивые схемы рисунков по клеточкам в тетради

Графический рисунок черной кошки по клеточкам Сделать рисунок черной кошки по клеткам Забавные схематические рисунки. Кошка с большими зелеными глазами Котенок и паук. Новый рисунок по клеточкам Котята. Графический рисунок по клеткам для детей Грустный котенок. Рисунки по клеточкам в тетради для детей

 

Рисунки по клеточкам, схемы для детей и взрослых

Простая графическая схема по клеточкам двух котов с сердечком Влюбленные коты. Легкая графическая схема по клеточкам Как схематически нарисовать кота по клеточкам Воздушный шарик и кот. Забавная картинка по клеточкам в тетради Два влюбленных кота. Схема рисунка по клеточкам

 

Нарисовать кота по клеточкам для начинающих

Схема кота по клеточкам из мультика Черно-белые рисунки котов по клеточкам КОТЫ. Герои мультфильмов по клеточкам в тетради

 

Красивые рисунки по клеточкам котов и котят

Как нарисовать красивых котят по клеточкам Рисунки по клеточкам КОТЫ И КОТЯТА Котенок. Легкие рисунки по клеточкам Рисунки забавных котов по клеточкам в тетради Серп луны и черный кот. Рисуем кота схематически

 

Рисунки по клеткам. Домашние животные. КОТЫ

Схемы котов для плетения фенечек Картинка спящего кота по клеточкам в тетради Как просто нарисовать кота по клеткам

 

Схемы и рисунки котов по клеточкам в блокноте и тетради

Как легко нарисовать кошечку в тетради в клеточку Рыжий кот. Рисунок по клеткам Милый котенок. Рисунки по клеточкам для детей Рисуем по клеткам. Красивая картинка котенка Как просто нарисовать кошку в тетради

 

Как легко нарисовать по клеточкам кошку

Синий котенок. Красивые графические рисунки по клеточкам Как просто нарисовать по клеточкам чеширского кота Графическая схема рисунка милого маленького котенка Котенок с большими глазами. Схема рисунка по клеточкам Как научиться рисовать кошку по клеточкам

 

Читать другие опубликованные статьи схожие по тематике:

“26 способов как нарисовать кошку поэтапно карандашом.Уроки рисования для начинающих“

“Коты. Раскраски для детей от 3 лет”

“Как легко нарисовать собаку по клеточкам?”

“Как нарисовать по клеточкам разные рисунки? Легкие рисунки из клеточек”

“Учим детей рисовать. Как рисовать по клеточкам еду?”

“Графический диктант по клеткам. Рисунки по клеточкам для детей”

“Зеркальные рисунки для детей. Дорисуй половинку по клеточкам”

Facebook Комментарии

красивые, интересные, легкие и сложные рисунки в тетрадь

Большую популярность в последнее время набирает рисование по клеткам. Чтобы вы всегда знали, что нарисовать и часами не искали новые идеи, мы приготовили картинки для срисовки по клеточкам. Раньше такие изображения чаще встречались в схемах для вышивки, а сейчас украшают тетради для рисования. Эти «пиксельные» изображения стали востребованы как у детей, так и у взрослых. С помощью пикселей создаются интересные картины с символами, животными, предметами и людьми.

Рисунки по клеточкам

Срисовывать рисунки по клеточкам не сложно. Так как все представленные картинки черно-белые, вам понадобится простой карандаш и тетрадь или листик в клетку. Затем выбирайте любой понравившийся рисунок, внимательно на него смотрите и начинайте поэтапно срисовывать.

Рисунки для срисовки по клеткам, которые мы отобрали очень разные. Среди них много животных, мультяшных персонажей и даже портрет. И если вам сложно представить, как это выглядит нарисованным по клеточкам, посмотрите на эти красивые картинки и убедитесь, что весьма оригинально и необычно.

Нарисованные картинки по клеточкам украсят ваши тетради и превратят их в художественные альбомы, главное не рисуйте в школьных тетрадях и на уроках, учителя не оценят вашу тягу к прекрасному.

Рисуя красивые рисунки по клеточкам с детьми, вы будете развивать у ребенка логическое мышление, внимание и аккуратность. А заодно и математику захватите, высчитывая где и в какой строке нужно рисовать.

На первый взгляд кажется, что все очень просто, считай, да рисуй. Так и есть, только нужно проявлять аккуратность и следовать строго по схеме. Упустив или переместив один квадратик, может потеряться правильность всего изображения.

Легкие рисунки по клеточкам

Для начинающих kakrisovat.com подготовил самые простые рисунки карандашом для срисовки по клеточкам. Они очень легкие и содержат в себе лишь контур изображения. Поэтому вы точно сможете нарисовать их, а потом перейти к более сложным рисункам.

Здесь главное понять принцип и сразу не запутаться в большом количестве квадратиков. Тогда срисовки пойдут легко, будете создавать несколько за один вечер. Конечно первое время вы можете постоянно искать для срисовки карандашом легкие картинки и только когда будете уверенны в себе на все сто, перейдете на сложные в перерисовывании изображения.

Мы собрали картинки разной сложности, так что вам будет куда расти и развиваться. Можете выбрать любой рисунок и проверить свои силы художника уже сейчас. Запасайтесь тетрадями, карандашами, ластиком и точилкой, мы знаем, что вас затянет и остановится будет трудно.

Как нарисовать по клеточкам на день рождения. Идеи украшения тетрадей в клеточку

Рисунки по клеточкам — хороший способ интересно скоротать свободное время. Это не только увлекательно, но и полезно. Рисование по клеткам развивает творческое мышление, улучшает координацию, имеет успокаивающее действите на нервную систему. Рисуйте в удовольствие!

Рисунки по клеточкам

Чёрный кот / Black cat:

Пандочка / Panda:

Три яблока / Three apples:

Муравей / Ant:

Божья коровка / Ladybug:

Ангел-солнышко / Angel sun:

Сердечко и нота / Heart and note:

Сердечко / Heart:

Лёгкие — Цветок / Flower:

Зелёное яблоко / Green apple:

Черепок / Skull:

Лицо / Face:

Герой мультфильма / Cartoon Hero:

Сложные — Винни-Пух / Winnie Pooh:

Андроид / Android:

Бант / Bow:

Печаль / Sadness:

Медвежонок в цвете / Bear in color:

Схемы — Ёлочка / Spruce:

Девушка / Girl:

Птица-персонаж / Hungry bird:

Любовь / Love:

Картинки — Симпсон / Simpson:

Мегги Симпсон / Maggie Simpson:

Девушка / Girl:

Маша / Masha:

Девушка-блондинка / Blonde girl:

Для девочек — Гам-ган стайл / Dandam style psy:

Я люблю шоколад / I like chocolate:

Рисунки по клеточкам для начинающих

Супермен / Superman:

Метал / Metal:

Печалька / Sadness:

Для начинающих — Тучка / Cloud:

Гитара / Guitar:

Маленькие рисунки по клеточкам

Из мультфильма / From cartoon:

Солнышко / Sun:

Маленькие — Мороженое / Ice cream:

Голодная птичка / Hungry bird:

Голодная птичка 2 / Hungry bird 2:

Видео с рисунками по клеткам — обязательно посмотрите это видео!!

Красивые рисунки по клеточкам

Влюблённый парень / Boy in love:

Супер Марио / Super Mario:

Лучшие друзья:

Красивые — Снеговик / Snowman:

AC/DC:

Флаг Америки / American Flag:

Сердечка / Hearts:

Красное яблоко / Red apple:

Вшоке / Vshoke:

Рисунки по клеточкам — прекрасный способ увлечь себя во время скуки. Рисовать легко и просто — нужно всего лишь следовать за уже готовой геометрией тетради — небольшими квадратиками. Размеры квадратиков очень удобны — пять на пять миллиметров. Для рисования прекрасно подходят обычные школьные тетради форм-фактора 205мм*165мм (высота — двадцать сантиметров и пять миллиметров, ширина — шестнадцать сантиметров и пять миллиметров). В таких тетрадках в вашем распоряжении для творчества будет доступно 1353 квадрата (одна тысяча триста пятьдесят три). Но это ещё не все! В последнее время стали популярными так называемые студенческие форматы тетрадей — по форм-фаткору они имеют больший размер который почти равен альбомному листу А4. Точные размеры такой студенческой тетради — двадцать восемь сантиметров в высоту и двадцать сантиметров пять миллиметров в ширину! Соответственно площадь полотна равна пятьсот семьдесят четыре сантиметра или две тысячи двести девяносто шесть квадратиков для рисования! Если же вам и этого мало — можете выйти на профессиональный уровень. Поясню что я имею ввиду: существуют намного большие полотна для рисования по клеточкам — это так называемые миллиметровки. Миллиметровка — или ещё как её называют, «масштабно-координатная чертёжная бумага» — это профессиональная профильная бумага для построения точных графиков, карт, черчения деталей. Условное сечение миллиметровки — один миллиметр! Есть также линии обозначающие стороны квадрата в пять миллиметров и один сантиметр, они выделяются на общем фоне толщиной линии. Небольшим недостатком миллиметровочной бумаги можно считать то что она имеет как правило не белый цвет — а зеленоватый или красноватый. Тем не менее при раскрашивании цветными ручками это не будет проблемой — всё и так будет в цвете. Одним словом, если вы заядлый фанат рисования по клеткам — миллиметровка будет для вас настоящим открытием. Это уже практически рисование по пикселях! Выбрав формат тетрадного листа для рисования, следует позаботиться также и о других физических характеристиках бумаги.

Среди них самыми важными являются два показателя — плотность и белизна. Плотность например, напрямую влияет на то, будет ли просвечиваться рисунок или нет. Согласитесь, просветы — это не очень хорошо. Так вот — оптимальная плотность бумаги в тетради для рисования — пятьдесят пять грамм на квадратный метр (не меньше), если больше — это только на пользу. Белизна, это говоря простыми словами — оттенок белого цвета. Оптимальная белизна бумаги — восемьдесят два — девяносто шесть процентов. Тут также следует понимать — слишком белая — это не хорошо, слишком тёмная — тоже плохо. Тем не менее переживать за это не следует, ибо производители в своём большинстве делают тетради именно в диапазоне 82-96 процентов, как это заложено в государственные стандарты по изготовлению тетрадей.

Чем закрашивать клетки? Как правило раскрашивают тем что есть под рукой — чаще всего это простая шариковая ручка синего цвета, или карандашы — серого цвета. Но согласитесь, двумя цветами раскрашивать не очень прикольно! Тут на помощь нам приходит широкий спектр цветных ручек, карандашей, фломастеров, мелков. Купить их можно в любом отделе канцелярии, цены — довольно разные и зависят от производителя, количества цветов, бренда, качества. В любом случае выбор очень широк и вы обязательно найдёте что-нибудь для себя! Какие цветные ручки лучшие для творчества — обычные шариковые, гелевые, капилярные или же масляные? На наше твёрдое убеждение, для рисования по квадратикам лучше использовать шариковые или масляные ручки. Гелевые конечно очень яркие, но имеют большой недостаток — они размазываются по бумаге, что в итоге может испортить весь рисунок. Капилярные ручки очень похожи на фломастеры — они тоже яркие, но имеют другой недостаток — их чернило очень крепкое и часто пропитывает лист бумаги. Если есть возможность — надо покупать масляные ручки. Они не размазываются, не пачкают руки, очень гладко скользят по бумаге. Идеальный вариан для рисования по клеткам! Если же вы фанат фломастеров, то также знайте — они делятся на два больших подвида: на водной основе и на спиртовой основе. Больше распространены фломастеры на водной основе — и не безосновательно, ведь они более безопасны. Также у такого типа фломастеров очень большой выбор цветов. Из недостатков — они могут промокать бумагу. Так что это не лучший вариант для рисования. Другой тип — спиртовые фломастеры. Сразу перейдя к недостаткам, отметим что они также могут просвечивать бумагу и к тому же имеют очень резкий спиртовый запах. Сомневаюсь что это вам понравиться! Третий инструмент для раскрашивания — карандаши. На сегодняшний день они делятся на четыре больших вида — деревянные цветные карандаши, акварельные, восковые и пластиковые. Деревянные карандаши знакомы всем нам ещё с детства, они хорошо подходят для рисования по клеточкам, но имеют один большой недостаток — часто ломаются. Не имеют этой проблемы другие два вида — восковые и пластиковые, но ихние контуры более толстые, что не очень хорошо для рисования по изящным квадратикам. И наконец акварельные карандаши — самый новый тренд. Их особенность — сначала рисовать нужно карандашом, а потом проявлять рисунок мокрой кисточкой. При всех преимуществах акварельных карандашей, использовать их для рисования по клетках не рекомендуем — будут промокания и просветы. Таким образом можно сделать небольшой вывод — лучше всего рисовать по квадратиках масляными ручками! Какие марки ручек, карандашей и фломастеров рекомендуется покупать? Итак, небольшой рейтинг: Ручки — BIC Cristal, BIC Декор, BIC Orange, BIC 4 COLORS FASHION. Карандаши — Koh-i-Noor, DERWENT, DALER ROWNEY, Faber Castell. Фломастеры — Crayola, RenArt, Centropen. Мелки — Rowney Perfix, Blair No Odor Spray Fix, Melissa & Doug, Kite, Радуга.

Приятного творчества!

(12 оценок, среднее: 4,00 из 5)

Дорогие пользователи, а так же гости нашего сайта, сегодня мы с вами рассмотрим технологию рисования рисунки по клеточкам .

Наверное, каждый из нас закрашивал клеточки на полях школьных тетрадей. У кого-то из этого всего получались интересные орнаменты, кто-то писал таким образом тексты, но далеко не всем известна технология рисования рисунков по тетрадным клеточкам , которую мы рассмотрим в этом уроке.

Если хотите усовершенствовать свой навык рисования обязательно прочитайте статью рисунки карандашом. Нужен ли особый талант?

Что такое рисунки по клеточкам?

Рисунки по клеточкам это вид изобразительного искусства, в котором используется пиксельная (точечная) графика. В зависимости от сложности такого изображения увеличивается его площадь и количество пикселей (в нашем случае – клеток), которые закрашиваются. Чем больше будет площадь изображения, тем выше будет реалистичность изображения при осмотре с дальнего расстояния.

Давайте рассмотрим один из примеров таких работ:

Как вы сами можете заметить, если смотреть на картинку издали – мы видим чёткое изображение, но если приблизиться – наблюдаем отдельные закрашенные квадратики. Это вариант более сложных , который мы рассмотрим чуть позже.

А сейчас давайте немного окунёмся в историю.

Косички по клеточкам (видео)

Какой след рисунки п

о тетрадным клеткам оставили в истории?

Безусловно, каждый из нас, чьё детство прошло в 80-е или 90-е, даст ответ на этот вопрос. И ответ на него простой – видеоигры!

Все мы помним легендарные игры из нашего детства: Марио, «танчики», Pacman, Donkey Kong и многие другие. Об этих играх знают и наши дети, но в курсе ли они, что Марио не всегда был трёхмерным?

В наше детство игры были 8-битными, и даже самые красочные пейзажи составлялись по технологии пиксельной графики. Используя эту же технологию, рисуются рисунки по тетрадным клеткам . И кто знает, может быть, легендарный Марио или Donkey Kong тоже когда-то были просто рисунками на полях школьной тетради?

Давайте и мы с вами попробуем нарисовать наш первый рисунок по тетрадным клеткам, и кто знает, может быть, он вдохновит вас на что-то такое, что перевернёт наш мир, как когда-то его перевернуло появление видеоигр.

Что необходимо для рисования простых рисунков по тетрадным клеткам?

Для рисования простых рисунков по клеткам нам понадобятся:

1. Чёрная гелиевая ручка
2. Фломастеры

Как нарисовать простой рисунок по тетрадным клеткам?

В рисовании простых рисунков по тетрадным клеткам нет ничего сложного. Всё что вам нужно – посчитать клеточки, начертить контур и закрасить рисунок в соответствии с оригиналом. Давайте рассмотрим это подробнее на примере сердечка.

1. Возьмите тетрадный лист и чёрную гелиевую ручку, поставьте три крестика так, как это показано на рисунке. Крестики будут означать то, что эти квадратики мы будем закрашивать чёрным цветом.

1. Далее нарисуйте линии, которые обозначат границы нашего рисунка в этой области.

1. Поставим ещё 6 крестиков сверху, по три крестика с каждой стороны. Обратите внимание на отступы, считайте клеточки, которые нужно оставить пустыми.

1. Проведём ещё 2 линии, чтобы обозначить границы рисунка.

5. Поставим ещё по крестику слева и справа, а так же проведём горизонтальную линию под верхними крестиками, обозначая границы в этом месте. Сделайте это так, как показано на рисунке.

6. Проставим 8 крестиков по вертикали, по 4 крестика с каждой стороны, так как это изображено на следующем рисунке.

7. Проведём вертикальную линию слева, а так же линии сверху, так как это сделано на рисунке. Этим мы полностью обозначим верхнюю границу нашего сердечка.

9. И сделаем то же самое с правой половиной сердечка.

10.Теперь нам осталось обозначить границы сердечка по всему его периметру, так как это сделано на рисунках ниже. Наш рисунок уже напоминает сердечко, однако, это ещё не всё. Теперь мы должны закрасить наше сердечко, чтобы оно приобрело готовый вид.

11. Закрасим внутреннюю часть сердечка красным фломастером, но оставим три клеточки белыми в левом верхнем углу, дабы обозначить световой блик. Сделайте это так, как это показано на рисунке.

12. Последнее, что нам осталось сделать – это закрасить чёрным фломастером те части, которые мы помечали крестиками.

И вот, наш рисунок приобрел свой готовый вид. Теперь вы умеете рисовать простые рисунки по тетрадным клеточкам и можете попробовать свои силы в рисовании других картинок, которые можно без труда найти в интернете по ключевым словам «8bit art ».

Если вы не хотите ограничивать свои умения рисованием простых рисунков, давайте рассмотрим с вами, как рисуются сложные рисунки по клеточкам . Изначально процесс может показаться вам очень сложным, но не отчаивайтесь раньше времени, стоит всего один раз попробовать и вы поймёте, что рисовать подобные рисунки не только просто, но и очень увлекательно!

Что необходимо для рисования сложных

рисунков по тетрадным клеткам ?

Для рисования сложных рисунков нам понадобятся:

1. Чёрная гелиевая ручка
2. Фломастеры или карандаши
3. Тетрадь (или тетрадный лист) в клетку
4. Компьютер
5. Фотография
6. Редактор фотографий Adobe Photoshop

В рисовании сложных рисунков , вам тоже придётся просчитывать клеточки, которые нужно закрашивать. Сложность в данном случае заключается только в том, чтобы не ошибиться в просчёте, так как клеточек у нас будет больше, нежели на предыдущем рисунке. А так же наша задача – правильно подобрать оттенки фломастеров или карандашей, чтобы наш рисунок соответствовал фотографии, с которой мы будем его рисовать.

И так, давайте приступим!

1. Для начала давайте подберём фотографию. Я выбрал фотографию милого щенка, которую нашёл в интернете. Вот она:

1. Давайте откроем редактор фотографий Adobe Photoshop и загрузим нашу фотографию:

Теперь нам нужно применить фильтр, чтобы обозначить клеточки на фотографии, по которым мы впоследствии будет ориентироваться. Для этого выбираем сверху вкладку «Фильтр» и жмём на параметр «Галерея фильтров».

4. В открывшимся окне выбираем вкладку «Текстура» и один раз кликаем на фильтр «Цветная плитка».

5.Ползунки параметров справа нужно установить следующим образом:

Размер квадратов – 10

Рельеф – 0

Затем нажимаем ОК.

6. Теперь наша фотография разбита на клеточки. Давайте сохраним её на нашем компьютере, чтобы впоследствии её можно было открыть на весь экран, либо распечатать.

1. Теперь остаётся только открыть или распечатать нашу фотографию, подобрать карандаши или фломастеры по оттенкам и закрасить клеточки в соответствии с оттенками.

Вот и всё!

Теперь вы умеете рисовать простые и сложные рисунки по клеточкам !

Благодарим вас за ваше внимание!

Следите за нашими новостями и учитесь рисовать вместе с нами!

Рисуем по клеточкам (видео)

Все мы художники в душе. И всем нам хочется свой мир разукрасить. А потому рисунки по клеточкам в тетради могут нам в этом помочь. С ними легко можно выполнить сложные и простые рисунки. Понять, как нарисовать сердце по клеточкам, или же, еду, цветы, игривую маму-кошку и ее забияку котенка. А хотите, у вас могут получиться и портреты? Например, есть такие рисунки по клеточкам, фото которых напоминают и изображения людей: мальчика и девочку, все эти разные рисунки несложно освоить.

Чтобы понять, как рисовать по клеточкам цветные красивые картинки, стоит познакомиться с техникой нанесения узора по номерам. Увидеть, что есть разные схемы и все они очень легкие, доступные даже новичкам. Ими можно быстро овладеть. Ведь для каждого из нас по небольшим частям воспроизвести нарисованных зверушек, смайлы и сердечки будет не сложно.

И все же, какие есть маленькие и большие, цветные и черно-белые рисунки, выполненные так, чтобы их легко было повторить; и какие перспективы овладеть этой техникой:

• Какие существенные преимущества имеют рисунки по клеточкам для начинающих?
• Тематические рисунки карандашом по клеточкам;
• Область применения таких оригинальных рисунков;
• Какие возможности дают красивые рисунки по небольшим частям.

Самое важное в знакомстве – увидеть, что это подготовленная на нашем сайте для вас коллекция очень красива. И здесь собраны интересные и легкие рисунки. Среди них есть те, которые высоко оценены нашими гостями и давно им знакомы, а есть и новые, любопытные рисунки по клеточкам для личного дневника.

Простые рисунки: здесь каждый может быть художником

Каждый может быть художником! Это заявление абсолютно точно гарантирует, что все наши гости, как только узнают, как научиться рисовать по клеточкам, и смогут скачать на сайте пару-тройку вариантов, красиво все повторят и разукрасят. Для каких бы целей ни служили наши подсказки, например, если это – картинки по клеточкам для девочек 12 лет или рисунки с аппетитной едой, все их можно использовать, чтобы отточить свои художественные способности.

Не только образцы готовых открыток у нас есть, но и рисунки по клеточкам: схемы. Такая подсказка, как готовая инструкция поможет двигаться четко по плану, а может быть и в своей, привычной, любимой манере выполнить работу любой сложности. Например, сделать рисунок мороженого по клеточкам, или животных, того же самого котика, или целые композиционные иллюстрации для личного дневника.

Не только для давних друзей нашего развлекательного ресурса предоставляется такая возможность, но и новые гости тоже получат шанс обучиться этому искусству, они имеют возможность взять своеобразный мастер класс, урок по изображению всевозможных картинок, на любой вкус и разной сложности.

Картинки на разнообразные темы

Самое привлекательное, что на сайте есть иллюстрации, интересные, как для девочек, так и для мальчиков. А есть нейтральные темы, к примеру, рисунки по клеточкам еда, а так же, иллюстрации по клеточкам животные: домашние любимцы или лесные зверушки, есть и сказочные, такие, как единорог.

Специально, для всех деток, кто любит мультфильм про милых пони и их дружбу, мы подготовили сюрприз! У нас есть картинки по клеточкам пони. Яркие, красочные, они очень привлекательные для деток. А потому мы предлагаем схему, как нарисовать пони по клеточкам. Эта и подобные «инструкции» достаточно понятные и лёгкие даже для ребенка. А главное, они интересные для малышей.

Отдельная категория – это рисунки по клеточкам смайлики. Они всегда интересны и всегда актуальны. Они передают настроение и их просто повторить. Для взрослых и детей такая тема именно то, что может подарить радость от плодотворного труда.

Удивительно, как часто подобные картинки для выручают нас. Благодаря им можно прекрасно провести время с ребеночком, сколько бы ему не было лет, 5,7 или только год. Мы можем в блокноте делать наброски на скучных совещаниях или в дороге занять себя. А картинки по клеточкам для личного дневника – это вообще незаменимая вещь. А потому, везде и при любых случаях скачивайте или сами нарисуете милые иллюстрации.

Более сложные рисунки

Всем тем, кто освоил это нехитрое искусство, и знает, как нарисовать по клеточкам котёнка и перед натюрмортом с едой пасовать не станет, мы готовы предложить и более серьезные и интересные варианты. Это могут быть все те же

Рисунки по клеточкам в тетради — отличный способ скоротать время. Для такого рисования не требуются специальные навыки. Достаточно открыть понравившийся образец рисунка на нашем сайте и следовать геометрии тетради — небольшим клеточкам. Стандартный размер клеточек в тетради — 5×5 мм. Для рисования по клеточкам подойдут самые простые школьные тетради.

Рисунки по клеточкам в тетради — отличный способ скоротать время

Благодаря рисованию вы сможете увлечь себя во время скуки. Рисование по клеточкам — это не только увлекательно, но и полезно. Те, кто не имеет художественного опыта, могут получить его благодаря этому типу рисования.

Рисунки по типам:

Рисование по клеточкам в тетради развивает творческое мышление, координацию и оказывает отличное успокаивающее действие.

Рисунки по клеточкам

Рисунки по уровню сложности

На нашем сайте представлены примеры рисунков разной сложности. У нас вы можете найти рисунки для начинающих (подойдут для детей и тех, кто хочет быстро и без лишних усилий создать красивый рисунок), а также более сложные варианты. Для начала вы можете попробовать создать самые простые рисунки, после чего переходить на более серьёзный уровень.

Неважно, какой сложности вы выбрали рисунок. Главное, что вы сможете приятно провести время и хорошо расслабиться. С такими рисунками могут справляться как взрослые, так и дети, которые никогда не занимались творчеством.

Польза для детей

Если взрослые могут просто скоротать время за этим интересным занятием, то дети извлекают из этого огромную пользу. Занимаясь рисованием по клеточкам, дети развивают воображение, математическое мышление и стратегию. Это даёт некоторый опыт, который способен помочь детям научиться рисовать более крупные и сложные рисунки.

Положительное действие такое рисование оказывает и на нервную систему. Это помогает успокоить нервы, снять психологическое напряжение и подавить гиперактивность. Рисование по клеточкам под спокойную музыку — отличный способ релаксации.

Что можно рисовать?

Рисовать по клеточкам можно что угодно: животных, растения, пейзажи, красивые надписи, смайлы, персонажей мультфильмов и т.д. На нашем сайте представлены разные варианты рисунков: как для девочек, так и для мальчиков. Вы можете выбрать любой из них и приступить к рисованию прямо сейчас.

Как рисовать?

Для рисования по клеточкам нужно запастись простой школьной тетрадкой (или более крупной, формата А4) и пишущими принадлежностями. Для закрашивания клеточек можно использовать простые ручки и карандаши, а также разноцветные фломастеры, мелки и ручки. Благодаря такому простому набору предметов можно создать по-настоящему красивые и необычные рисунки. Приступайте прямо сейчас.

Легкие рисунки по клеточкам для начинающих

Сегодня рисунки по клеточкам популярны как среди детей, так и среди взрослых. Чтобы создавать такие рисунки, людям не нужны какие-либо навыки и умения. Даже если вы впервые держите в руках фломастер, у вас без особого труда получится создать красивый рисунок. Всё, что вам нужно для такого рисования — простая школьная тетрадь, несколько фломастеров (или простая шариковая ручка) и немного свободного времени.

Польза рисования по клеточкам

Рисование по клеточкам полезно как для взрослых, так и для детей. Взрослые благодаря рисованию по клеточкам могут скоротать время за интересным занятием, а также снять эмоциональное напряжение. Такое рисование хорошо успокаивает, что очень актуально для людей, живущих в современном городском ритме. Также рисование по клеточкам будет полезно тем, кто хочет получить небольшой опыт в творческой сфере. Благодаря этому виду рисования можно освоить основы творчества, что положительно скажется на общих умениях.

Дети благодаря рисованию развивают воображение, внимание и даже математическое мышление. Рисование способно снять эмоциональное напряжение и подавить гиперактивность у непоседливых детей. Если вы хотите, чтобы ваш ребёнок получал пользу в свободное время, заставьте его рисовать. Это гораздо полезнее и познавательнее, чем сидеть целыми сутками в интернете.

Рисунки по клеточкам по уровню сложности

На нашем сайте представлены рисунки как для начинающих, так и для опытных художников. На самом деле, каким бы сложным ни был рисунок, с ним справится любой. Просто на некоторый рисунок нужно потратить меньше времени, на другой — значительно больше. Для создания некоторых рисунков достаточно одного простого карандаша, для других нужны цветные фломастеры.

Если вы впервые зашли на наш сайт, стоит выбрать . Такие рисунки максимально просты и отнимают минимум времени. Буквально за 10-15 минут у вас получится готовый рисунок, в процессе рисования которого вы получите много удовольствия.

Что можно рисовать?

Если вы выбрали легкие рисунки по клеточкам для начинающих , можете нарисовать разнообразные смайлы, красивые надписи, цветы, фигурки, животных и многое другое. На нашем сайте представлены разные варианты рисунков, поэтому вы легко найдёте подходящий для себя вариант.

Чем рисовать?

Чтобы создать рисунок по клеточкам, вам понадобится самый простой набор: простая школьная тетрадь, набор цветных карандашей/фломастеров или обычная ручка. Выбирайте любой понравившийся рисунок и приступайте к рисованию прямо сейчас.

Фотографии рисунков по клеточкам

Вашему вниманию каталог фотографий примеров и эскизов для рисования по клеточкам в тетрадках.

Фотографии котиков

Маленькие рисунки по клеточкам

Маленькие рисунки по клеточкам — отличный способ скоротать время. Рисование этого типа пользуются популярностью среди взрослых и детей. Это позволяет расслабиться и получить удовольствие от процесса.

Польза рисования по клеточкам

Такое рисование не только увлекательно, но и очень полезно. Те, кто хочет научиться красиво рисовать, могут начать именно с рисунков по клеточкам, поскольку они максимально просты и не требуют больших временных затрат. Школьники могут создать целый рисунок на перемене, а взрослые — во время свободного времени на работе, что позволит успокоиться и снять эмоциональное напряжение.

Что можно рисовать?

Чтобы нарисовать маленький рисунок по клеточкам , достаточно иметь простой набор принадлежностей: обычную школьную тетрадь и набор фломастеров (или простую ручку). Вы можете нарисовать красивую надпись, смайлы, небольших животных, различные символы и многое другое. Процесс рисования займёт всего 10-15 минут.

Из представленного списка вы можете выбрать любой понравившийся рисунок и приступить к рисованию прямо сейчас.

Рисунки по клеточкам востребованы как среди взрослых, так и среди детей

Рисунки по клеточкам востребованы как среди взрослых, так и среди детей. Когда вам нечем заняться и хочется расслабиться, стоит попробовать этот вид рисования. Рисунки по клеточкам — это отличный способ расслабиться и доставить себе удовольствие.

Для создания такого рисунка вам понадобится самый простой набор принадлежностей: школьная тетрадь, простая ручка или набор фломастеров/карандашей. На создание одного рисунка уйдёт не более 20 минут.

Виды рисунков

На простом листе в клеточку вы можете изобразить почти что угодно: животных, цветы, смайлы, персонажей мультфильмов или видеоигр, разнообразные символы и многое другое. На нашем сайте представлен отдельный список «рисунки по клеточкам для девочек». В списке имеются как сложные рисунки, так и самые простые. Заниматься таким рисованием вы можете дома или на переменах в школе. Самый простой рисунок можно создать всего за 10 минут.

Рисунки по клеточкам для девочек позволят расслабиться и улучшить творческие навыки. Такое рисование не только познавательно, но и очень полезно.

Рисунки для девочек

Фотографии рисунка по клеткам — Сердечко

Фотографии рисунков по клеткам — Пони

Сегодня рисунки по клеточкам очень популярны среди подростков

Сегодня рисунки по клеточкам очень популярны среди подростков. Большой популярностью пользуются рисунки для личного дневника . На таких рисунках может быть изображено почти что угодно: от животных до смайлов и различных символов.

Польза рисунков по клеточкам

Благодаря таким рисункам дети и подростки могут провести свободное время с пользой. Даже если у вас нет творческих навыков, вы легко сможете нарисовать рисунок по клеточкам любой сложности. Если вам необходимы рисунки для личного дневника , ознакомьтесь с нашим списком и выберите наиболее подходящие варианты для себя.

Занимаясь таким рисованием, дети развивают творческие навыки, воображение, внимание и даже математические способности. Благодаря такому рисованию можно отлично расслабиться и снять эмоциональное напряжение.

Что нужно для рисования?

Если вы ведёте красочный и яркий дневник, вам понадобится набор цветных фломастеров или карандашей. Если же красочность дневника вам не важна, можно использовать простую ручку или карандаш. Нарисовать 1 рисунок можно всего за 10-15 минут.

Рисунки для мальчиков по клеточкам пользуются большой популярностью

Рисунки для мальчиков по клеточкам пользуются большой популярностью. В первую очередь они актуальны для тех, кто хочет научиться красиво рисовать. Подобные рисунки создаются всего за 15-30 минут, а также значительно улучшают творческие навыки, благодаря чему дети могут быстро научиться рисовать.

Рисунки для мальчиков

Этот раздел включает в себя рисунки разных видов: животные, машины, персонажи из различных вселенных (например, Майнкрафт или Марвел), необычные смайлы и различные символы. Примечательно, что рисунки для мальчиков чаще всего создаются одним цветом, поэтому для рисования вы можете использовать простой карандаш или ручку. Если же для вас важна красочность, можете пользоваться разноцветными карандашами или фломастерами.

Рисунки Ниндзя черепашки по клеточкам

Польза рисунков по клеточкам

Такой тип рисования способен улучшить навыки и умения в области рисования, а также развить воображение и внимание. Кроме того, благодаря рисованию можно отлично расслабиться. Потратив всего 15 минут, вы сможете создать красивый и привлекательный рисунок.

Рисунки по клеточкам — отличное решение для тех, кто хочет научиться красиво рисовать

Рисунки по клеточкам — отличное решение для тех, кто хочет научиться красиво рисовать. Такие рисунки не требуют специальных навыков и умений. Всё, что вам нужно — школьная тетрадь и набор фломастеров. Создать рисунок по клеточкам можно и с помощью простого карандаша. На создание рисунка по клеточкам средней сложности уходит 30-40 минут.

Как рисовать?

Единых правил по такому рисованию нет. Но гораздо удобнее рисовать сверху вниз, заполняя рисунок слева направо. Для общего развития можно попробовать рисовать от центра к краям изображения.

Для рисования можно использовать как простые карандаши или ручки, так и разноцветные наборы. Изобразить можно что угодно: животных, цветы, персонажей известных мультфильмов или игр, смайлы, красивые надписи и т.д.

Фото рисунков по клеточкам

На нашем сайте представлены качественные фотографии рисунков разной направленности. Благодаря им вы сможете быстро создать красивый рисунок. Процесс рисования доставит удовольствие и поможет хорошо расслабиться. Приступить вы можете прямо сейчас.

Ам ням по клеткам

Кактус по клеточкам

Мороженое -рисуем по клеточкам

Слово любовь по клеткам

Рисунок собачки по клеточкам

Рисуем хомяка по клеточкам

Если Вам понравились рисунки, пишите в комментариях!

Сегодня темой нашего разговора станут 3D-рисунки по клеточкам: развлечение в школьной тетради помнится нам еще с далеких времен уроков и перемен. Не стоит думать, что в этом занятии нет ничего полезного и развивающего, как могли бы нам сказать наши школьные учителя.

Тетрадь в клеточку

У каждого школьника есть тетрадь в клеточку. Прилежные ученики делают в них задания учителей, в то время как другие дети тратят свое время на создание интересных картинок.

Это могут быть простые схематичные изображения и узоры, а могут быть мультипликационные персонажи или полноценные картины с определенным сюжетом и вдохновляющей графикой.

Если человек не знает, как провести свое свободное время, ему может помочь рисование. Разлинованная бумага помогает легче ориентироваться в пространстве, создавая интересные художественные шедевры.

Возможно, тебе просто самому лень разрабатывать сложные сюжеты. Но художественное творчество может включать и создание довольно простых узоров, состоящих из обыкновенных геометрических фигур.

Тем не менее, созданные таким простым способом рисунки вполне способны смотреться очень эффектно и интересно. И вы сможете почувствовать себя творцом настоящих шедевров, не прилагая для этого огромных усилий.

Не хотите рисовать сложные схемы? Наличие клеточек в тетради поможет вам не тратить свое драгоценное время на проведение дополнительной разметки пространства вашего будущего холста.

Если ты никогда не создавал картинки с помощью клеточек, то никогда не поздно будет начать экспериментировать в этом направлении. Если ты хочешь попробовать что-то новое, то не упусти свой шанс проявить свои творческие способности этим довольно простым, но интересным способом.

Развлекайся в свое удовольствие. Сам творческий процесс не менее важен, чем конкретный результат твоей работы. Тем более, первоначальные результаты, возможно, в чем-то неудачные, легко будет исправить с помощью старания и упорства, проявляющихся в дальнейших экспериментах в данном направлении.

Рисуем по клеточкам

Что можно нарисовать по клеточкам? В качестве одного из простых примеров можно привести .

Сейчас очень популярно рисовать разнообразных мультипликационных персонажей. Каких героев можно встретить на трехмерных рисунках:

• Стича;
• Джерри;
• Скуби Ду.

Необязательно рисовать конкретных персонажей. Возможно, вам больше придется по вкусу милые животные.

Если вы хотите создать трехмерное изображение, то первоначально вам нужно будет определиться с его тематикой. Чтобы почерпнуть вдохновение, попробуйте посмотреть уже готовые работы, выполненные в этом жанре.

Когда вы определитесь с темой, можно приступать и к непосредственной работе над своим будущим шедевром. Возможно, на первых этапах вам будет лучше ограничиться самыми простыми рисунками без замысловатых сюжетов и интересных форм.

Клеточки будут помогать вам соблюдать пропорции. А если речь идет о композициях из простых геометрических фигур, то тетрадь в клетку — идеальный вариант вашего холста.

Клетки послужат вам специальной разметкой. Фактически, формы для рисования квадратиков для создания более сложных фигур уже заданы: осталось только обвести их с помощью карандаша.

Как создавать реалистичные рисунки

Реалистичность — это желанное свойство трехмерного изображения в стиле 3D, однако не всем художникам удается добиться подобного эффекта. Для того, чтобы воплощение ваших творческих способностей смогло как будто бы сойти с поверхности холста, выйдя за его рамки, вам не нужно применять никакой специальной магии.

У профессиональных художников есть свои секреты, которые работают не хуже любого волшебства. И вот уже человечек как будто существует не в плоскости, а в объеме, перешагивая из одной среды в другую.

Для этого можно использовать самые различные эффекты . Самый простой способ — использование игры света и тени.

Кроме того, возможно использование и других нюансов. Например, не стоит забывать о том, что линии должны ложиться на плоскости немного не так, как они располагаются в пространстве.

Если вы хотите нарисовать глаз или милую панду, то клеточки также помогают вам в том, чтобы создать данные элементы. В этом случае клеточки будут служить элементарными элементами в рамках большой картины.

Представьте, что речь идет о графическом изображении, представленном на компьютере. Все мы знаем такое понятие, как пиксели.

Представьте, что клеточки тетради — это именно эти пиксели, задающие определенное разрешение фотографии или экрану компьютера.

Аналогичный способ представления комплексных изображений используется в схемах для рукоделия. На основе маленьких квадратиков элемент за элементом создается полноценное изображение подобно мозаике.

Рисунки на полях

Многие школьники на скучных уроках любят рисовать на полях. Зачем они это делают?

Не стоит обвинять их в лени и нежелании учиться. Ведь желание рисовать — это проявление творческих способностей ребенка.

Рисование — это искусство. Но чтобы им овладеть в достаточной мере, необходима практика.

Упорство и труд являются необходимыми условиями для достижения поставленных целей. И если ребенок хочет развиваться в этом направлении, то не стоит его ограничивать в данном желании.

Пространственное мышление позволит начинающему художнику по-новому взглянуть на окружающие его в реальном мире объектов. Поняв общие принципы переноса линий из пространства на плоскость, вы сможете совершать данные манипуляции в автоматическом порядке путем нехитрых манипуляций.

Что вы хотите изобразить с помощью вашего нового шедевра изобразительного искусства? Будет ли это узор, объект городского ландшафта, пейзаж или персонаж из мультсериала?

К каждой теме необходимо подходить по-своему. Какие-то объекты будут более сложными для воспроизведения, а какие-то — менее.

Но тем не менее, в изобразительном искусстве в любом случае существует ряд законов, соблюдение которых обязательно вне зависимости от темы вашего творчества.

Кроме того, вы можете сгибать один лист или склеивать листы таким образом, чтобы зрителям казалось, что ваше изображение переходит из одной части холста в другую.

Если лист обладает четко видимой разметкой в виде квадратиков или прямых линий, вы можете изменить форму этих элементов непосредственно на вашем объекте.

Таким образом, будет создаваться полное ощущение, что ваш персонаж обладает объемом по сравнению с основной плоской поверхностью листа бумаги.

Кроме того, данный эффект можно усилить с помощью создания теней. Это можно делать с помощью различной степени нажатия карандаша на холст или с помощью использования письменных принадлежностей с различными параметрами жесткости и мягкости.

Несмотря на то, что рисунки на полях тетради многими учителями считается чуть ли не хулиганством, они все-таки обладают не только развлекательными, но и развивающими функциями. Вы сможете воплотить в жизнь свои творческие идеи и научиться рисовать.

С помощью клеточек вы сможете хорошо рассчитать масштаб и пропорции изображения. Для начинающего художника — это самый оптимальный способ набить руку, создавая свои первые рисунки.

Создание рисунков 3Д на бумаге

Созданием рисунков 3Д на бумаге занимаются как дети, так и взрослые. Это удивительное занятие позволяет каждому человеку почувствовать себя настоящим волшебником, оживляющим изображение.

3D-рисунки для начинающих

Часто те люди, которые только начали заниматься созданием необычных картин, задаются вопросом о том, как нарисовать 3D-рисунок на бумаге карандашом.

Сегодня можно найти много информации о том, как рисовать самые простые и распространенные среди новичков 3D-рисунки. Рассмотрим несколько уроков, как сделать это поэтапно:

1. Машина. Желающим нарисовать машину сначала необходимо наметить корпус, стекла и колеса, а затем двери. Все это выглядит как обычный рисунок. Далее машину нужно раскрасить, то есть придать ей цвет. Как только он станет ровным, можно приступать к нанесению тени. Постепенно, начиная с самого светлого тона, с помощью штрихов наносится тень. Чтобы нарисованный автомобиль выглядел реалистично, намечается линия обреза, часть листа удаляется.
2. Сердце. Для начинающих этот образ — то, что нужно. Как и в случае с созданием машины, сначала делается набросок, а затем слоями наносится тень. Важно обращать внимание на то, где находится источник света, так как в одном месте рисунок должен быть затемнен, а в другом, наоборот, иметь более светлые оттенки.
3. Лестница. Нарисовать 3Д-лестницу просто. Понадобится плотная бумага, карандаш и линейка. Лист бумаги сгибается посередине, от этой точки в разные стороны рисуем по 2 параллельные прямые. С обеих сторон между параллельными прямыми рисуем ступеньки. С помощью линейки и карандаша концы лестницы соединяем. Линии должны быть едва заметны, словно это тень. Складываем бумагу как открытку и получаем оптическую иллюзию.
4. Кошка. Это более замысловатый вариант. Для начала нарисуем кошку, начиная с туловища. Выделим линии спины, лап, хвоста и мордочки. Рисуя кошку, стараемся придать мордочке выражение. Там, где туловище соприкасается с воображаемой поверхностью, создаем тень. Кошачий хвост тоже слегка затемняем со всех сторон, чтобы создать ощущение, что он не лежит на поверхности, а остается в воздухе.
5. Пони. Делаем набросок туловища пони, при помощи точек или любым другим удобным способом дорисовываем голову, ноги, копыта и т. д. Гриве и хвосту стоит уделить особое внимание. 3Д-рисунки от обычных отличаются своей реалистичностью. Выделяем нужные линии для достижения этого эффекта наносим тень. Ничего сложного в создании пони нет, если вы уже рисовали кошку.

Заключение

Теперь вы знаете, как нарисовать 3Д-рисунок, который сможет удивить ваших близких и друзей. Нарисовать 3Д-рисунок на бумаге сможет каждый, если приложить немного усилий. С первых попыток может что-то не получиться, но это лишь дело времени. Главное — начать.

Как рисовать по клеточкам лего: красивые картинки для начинающих

Здравствуйте, читатели блога!

Многие еще со школы привыкли делать зарисовки в тетрадях. Создавать изображение в тетради намного проще, чем на простом листе бумаге. Поэтому этот метод нравится почти всем. О том, как рисовать по клеточкам в тетради красиво расскажем в этой статье.

Легко и доступно

Как хорошо рисовать, если нет опыта? Для начинающих зачастую самым большим вопросом является именно то, как начать работу. Для начала нужно освоить легкие рисунки. И даже, если у вас нет большого опыта рисования, вы с легкость сможете выполнить маленькие рисунки.

Для того, чтобы понять как рисовать по клеточкам цветные красивые картинки, стоит освоить технику, когда нужно наносить цвет соответственно конкретному номеру.

Живопись по номерам – так еще называют подобное изображение. Своего рода раскраска способна увлечь и взрослых и  детей. Создать такую картину может каждый, поэтому живопись по номерам станет отличным подарком на День Рождения или другое торжество.

Если вы давно искали похожий подарок, но не могли найти, заходите на AliExpress и выбирайте понравившейся холст. Тут вы точно найдете, что искали!

Животные

Вернемся к тому, как рисовать рисунки по клеточкам. Хотите изобразить собаку, котика, пони или единорога? Отлично, вот примеры этих картинок:

Дети обожают рисовать котиков и щенков. Поэтому, если вы не знаете, что нарисовать вместе с ребенком, начните с животных.

Нарисовать кота совсем не сложно, но, что делать, если ребенку нравятся слоны или, скажем, динозавры? На этот случай у нас есть необычные иллюстрации, которые изобразить также несложно. Наглядно покажем, как изобразить необычные картинки.

Люди

Изображать людей сложно – скажете вы. Нет, если их рисовать по клеточкам. Цветные и черно-белые рисунки на любой вкус:

В тетради можно легко нарисовать красивую девочку, человека, или влюбленную пару. Если изображение достаточно большое, лучше сначала наметить его карандашом, а затем приступать к работе с цветом.

Разные изображения

Разные красивые рисунки можно выполнить в свободное время в блокноте, возвращаясь домой, например. Можно украсить свой личный дневник или пополнить свою личную коллекцию зарисовок.

Как научиться рисовать косичку по клеточкам? Для многих это довольно непростая задача. Рекомендуем посмотреть, как рисовать косичку по клеточкам в этом видео, где наглядно виден весь процесс:

Также есть совсем простые рисунки пикселька: лол, смайлики, оружие, сердечки и цветочки.

Хотите нарисовать еду? Вот несколько примеров:

Хотите изобразить милых зверюшек или цифру 8 к празднику 8 марта, вот, как это можно сделать:

Поэтапно выполняя шаг за шагом, у вас обязательно получится прекрасное изображение.

Самое важное

Если хотите, чтобы ваше изображение было красивым, необходимо соблюдать 3 простых правила:

1. Аккуратность. Старайтесь не выходить за клеточки.
2. Поэтапность. Закрашивайте новые элементы шаг за шагом, например, сверху вниз.
3. Структурированность. Четко следуйте рисунку.

Для маленьких

Как дети рисуют по клеточкам? Для детишек раннего возраста особенно важно, чтобы процесс был интересным. Рисовать легко и красиво получится у каждого, для этого нужно не выходить за клеточки и использовать яркие цвета.

Работать можно цветными карандашами и фломастерами.

Как правило, малышей очень легко увлечь в этот процесс. Такое рисование развивает мелкую моторику и концентрацию.

Попробуйте выполнить следующие работы с вашим малышом:

Мальчики особенно любят машины. Вот несколько картинок с машинками:

Неважно сколько лет ребенку 3, 5, 7 или 10 лет, для каждого найдётся интересная тема, которую ему будет интересно воплощать самому.

Сложные рисунки

Для тех, кто уверен в своих силах и уже нарисовал большую часть представленных картинок, предлагаем более сложные изображения:

Большие изображения отнимают больше времени и заставляют сильнее концентрироваться на работе. Но и результат получается весьма интересный!

Заключение

О том, как рисовать рисунки по клеточкам в тетради знают многие еще со школьной поры. Надеюсь, что представленные здесь изображения помогут вам развивать свое творчество, креативность и усовершенствовать навыки рисования. Удачи!

Хотите получать больше информации об изобразительном искусстве? Подписывайтесь на блог!

До встречи!

чистый лист бумаги дневник путешествия письменный журнал рисунок альбом для рисования тетрадь SAYEEC ретро тонкий войлочный чехол тетради в твердом переплете

Пустой бумажный дневник. Дневник для путешествий. Дневник для рисования. Блокнот для рисования. Тетрадь для рисования SAYEEC. Тонкая фетровая обложка в стиле ретро. Блокноты в твердом переплете.

. Фетровая кожаная обложка ручной работы, записная книжка для дневника, классический винтажный блокнот SAYEEC, повседневный блокнот с длинной полосой, качественная кремовая бумага без подкладки, идеально подходит для заметок, альбом для рисования, дневник путешествий。 Чистый лист бумаги: пустая функция, вы можете рисовать интеллект-карты, зарисовывать идеи или свободно писать заметки на странице. Идеально работать как дневник, блокнот для рисования, альбом для набросков, записная книжка путешественника, дневник, органайзер купонов, фотоальбом и т. Идеальный подарок на день рождения, подарок на Хэллоуин, рождественский подарок для себя, семьи и друзей. 。 Украшение на длинном ремешке: ультра-стильный роскошный дизайн, который имеет определенный вид традиционного в сочетании с антикварной / винтажной атмосферой, но при этом имеет современный и современный внешний вид.Будьте предметом зависти для семьи и друзей, купив для себя или сделав подарок тому, кто ценит прекрасные вещи в жизни. 。 Удобный дневник путешествия: идеальный размер для сумочки и школьной сумки; идеальный размер для удобной транспортировки, ненавязчивый вес и роскошная эластичность кожи, которая не ¡¯ не добавляет ограничительной массы или занимает много места. Поместится в больший карман, сумочку, портфель или просто в руку, в которой легко делать заметки в мгновение ока. 。 100 листов / 200 страниц бескислотных страниц из переработанного хлопка высшего качества.Безвреден для окружающей среды, в производственном процессе не используются деревья. Плотная бумага гарантирует отсутствие остаточного проступания с других страниц, гладкая и ровная поверхность, на которой приятно писать, и обеспечивающая растекание без перетаскивания. 。 Гарантия производителя не распространяется. Ознакомьтесь с политикой возврата Amazon, которая обычно предлагает бесплатный возврат в течение 30 дней с момента получения. 。 Спецификация: -Бренд:。 -Продукт: классический винтажный мягкий фетровый кожаный чехол для ноутбука。 -Материал:。 -> Обложка: классический винтажный мягкий войлочный кожаный чехол。 -> Внутренняя бумага: двустороннее смещение。 -Использование: дневник, эскиз, Каракули, написание журнала и т. Д.。 -Вес: около 250 г。 -Размер: -> Размер обложки: 19.5 * 13,0 см / 7,7 * 5,12 дюйма。 -> Размер внутренней бумаги: 19 * 12 см / 7,5 * 4,73 дюйма。 -Цвет: черный / фиолетовый / синий。 -Для: унисекс。 -Стиль: винтажный ретро-стиль。 -Твердость: мягкий 。 -Фактор моды: дизайн с длинным ремешком。 -Внутренняя бумага: двустороннее смещение。 Особенности: • 100% гарантия качества。 • Прочная двусторонняя офсетная бумага ведущего бренда。 • Обложка дневника путешествий в классическом и винтажном стиле, очень уникальная и привлекательно。 • Чистые листы бумаги идеально подходят для письма, рисования, набросков, наклеек фотографий или записи удивительных воспоминаний.。 Обратите внимание: -Из-за различных дисплеев компьютеров цвет реального предмета может немного отличаться от показанного на картинке. -Экологичность, если есть небольшой запах материала, это нормально, запах исчезнет на улице в течение нескольких дней. -Позвольте погрешность в 1-2 см из-за ручного измерения. Что в коробке?

Как создавать интерактивные рисунки Google

Рисунки Google, доступные в G Suite for Education, предлагают широкий спектр возможностей для творчества учащихся.Хотя Google Drawings часто упускается из виду в пользу основных приложений G Suite, таких как Документы, Слайды и Таблицы, он предлагает широкий спектр возможностей для всех учебных программ. От детского сада до средней школы существуют бесконечные возможности, ограниченные только воображением учителей и учеников. Имея это в виду, мы исследуем один из этих потенциалов — создание интерактивных рисунков Google.

Интерактивные изображения позволяют учащимся объединить множество различных материалов в одно статическое изображение.Секрет создания этих интерактивных изображений заключается в возможности прикреплять ссылки к внешнему контенту и встраивать эти ссылки в само изображение, делая рисунок «интерактивным».

Например, учащиеся могут поместить статическое изображение диаграммы Венна на холст Google Drawing. Теперь вместо того, чтобы просто написать несколько предложений по каждой теме, студенты могут развить эти мысли, вставив ссылки на другие документы, видео, статьи и т. Д. Непосредственно поверх диаграммы Венна. Представьте, что ваши ученики ссылаются на видео или аудио аргументы, которые они приводят в пользу вступления в Первую мировую войну, а затем создают альтернативную точку зрения в другом видео и связывают ее с другой стороны.Перейдите по этой ссылке, чтобы увидеть пример: Пример диаграммы Венна вступления в Первую мировую.

Хотя копирование и вставка ссылки в текстовое поле в Google Drawing работает, есть более чистый и эффективный способ выполнения задачи: использование вставленных объектов. Эти объекты могут включать линии, фигуры или изображения, вставленные в чертеж. Когда учащийся добавляет один из этих объектов на холст для рисования, этот объект можно связать гиперссылкой с другим существующим веб-контентом. Когда пользователь щелкает мышью, он запускает новый контент, чтобы узнать больше.

Вот процесс создания интерактивных рисунков Google:

1. Вставьте объект (фигуру, изображение, линию или стрелку), выбрав «Вставить» на панели инструментов и сделав выбор в раскрывающемся меню.
2. Когда объект выделен, выберите значок «Ссылка» на панели инструментов (сочетание клавиш — cmd-k или ctrl-k). Вы также можете щелкнуть объект правой кнопкой мыши и выбрать в меню «Ссылка».
3. Появится небольшое окно с пробелом для вставки ссылки.Вставив ссылку, нажмите Применить.
4. Вот и все. Теперь учащийся или любой зритель может щелкнуть фигуру и перейти на связанный веб-сайт.

Идеи для использования интерактивных рисунков Google

Создать архив обучения студентов по теме:

студентов-естественников из класса анатомии, изучающих человеческое тело, могли вставить изображение тела в рисунок Google. По мере того, как учащиеся исследуют каждую часть или систему тела, попросите их создать новую точку доступа, связанную с внешним источником по теме или, возможно, с заметками учащегося, сделанными в Документе Google для получения дополнительной информации.Точно так же учителя социальных наук могут вставить карту в качестве фона и получить информацию о частях карты, связанных с новым контентом. Учителя английского языка могли вставить обложку романа в качестве фона, а ученики могли создавать горячие точки, связывающие их с контентом, который они создали в ходе чтения книги в классе. Возможности безграничны!

Обновите свои учебные пособия:

Вместо того, чтобы раздавать студентам учебное пособие с 25 различными вопросами и просить их отвечать в текстовой области под каждым вопросом, поместите темы, затронутые в учебном пособии, в рисунок Google и попросите учащихся создать интерактивный документ, содержащий ссылку по различным темам.Студенты могут приветствовать возможность ссылки на видео YouTube для просмотра вместо повторного чтения учебника.

Части ячейки Пример

Создание интерактивной графики Организаторы:

Студенты могут использовать изображения графических органайзеров и создавать различные горячие точки для контента на основе темы графического органайзера. Как упоминалось выше, это очень хорошо работает при создании интерактивных диаграмм Венна. Дополнительные идеи для этих типов интерактивных рисунков Google включают временные шкалы, блок-схемы и интеллектуальные карты эссе до их составления.

Пример диаграммы Венна вступления в Первую мировую войну

Используйте интерактивные рисунки Google с Visible Thinking Routine из Project Zero :

Видимые процедуры мышления отлично подходят для того, чтобы побудить студентов задавать вопросы и сделать их мышление видимым. Предложите учащимся создать интерактивный рисунок Google с обрисованными в общих чертах аспектами видимого образа мышления, а затем вставить в рисунок текст и ссылки, чтобы поддержать обнаруживаемые ими точки обзора.Например, если учащиеся выполняют процедуру «увидеть-подумать-чудо», они могут сфотографировать объект, который они наблюдают, а затем использовать текстовое поле, чтобы ввести свои ответы на то, что они думают и задаются вопросом. Когда это будет завершено, они смогут исследовать свои «чудеса», вставив горячие ссылки на статьи или источники, которые содержат информацию по их вопросам.

См. — Думать — Интересно, Пример

Пример круга точек обзора

Заключение

Google Drawings имеет безграничные возможности, и создание этих интерактивных Google Drawings — один из способов подтолкнуть своих учеников к дальнейшему развитию информации, одновременно проявляя творческий подход.

Построение функциональной карты капсида аденоассоциированного вируса с высоким разрешением путем массового параллельного секвенирования

Условия культивирования клеток и эксперименты

Клетки эмбриональной почки человека (HEK) 293, AAV293, были приобретены у Stratagene. Клетки CHO Pro5 и Lec2 были подарены A. Asokan (Университет Северной Каролины, Чапел-Хилл). Клетки HEK293 выращивали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM, Lonza), а клетки CHO Pro5 и Lec2 поддерживали в альфа-минимальной необходимой среде (Alpha-MEM, Sigma-Aldrich).В среду добавляли 10% фетальную бычью сыворотку (FBS), L-глутамин и пенициллин-стрептомицин. Замороженные клеточные запасы были созданы без дополнительной аутентификации из исходных флаконов, которые мы получили перед использованием для экспериментов. Эти клеточные линии были протестированы на загрязнение микоплазмой с использованием микоплазменного анализа 16S рДНК ПЦР и оказались отрицательными. Анализы связывания на поверхности вирусных клеток и трансдукции проводили с использованием клеток CHO Pro5 и Lec2, высеянных на 24- или 96-луночные планшеты за 1 день до каждого эксперимента, как подробно описано в дополнительных методах.

Конструкция плазмиды

pAAV-Серотип-x-VBC-y (Серотип-x = серотип 1, серотип 2, серотип 3,…), pAAV9-SBBANN-AA-x-VBC-y (AA-x = AA356, AA358, AA360,…) и pAAV2R585E-SBBXEB-HP-x-VBC-y (HP-x = 441-00700, 441-16000, 443-00009,…) представляют собой плазмиды AAV, с помощью которых мы продуцировали каждый серотип и мутант AAV. вирусный клон с клон-специфическим pr-VBC-y (y = 1, 2, 3,…). Все эти плазмиды являются производными pAAV9-SBBANN-VBCLib (код доступа KF032296) или pAAV2R585E-SBBXEB-VBCLib (код доступа KF032297).Подробную методологическую информацию о конструировании плазмид и высокопроизводительном двойном аланиновом и гексапептидном сканирующем мутагенезе можно найти в дополнительных методах.

Получение библиотек AAV со штрих-кодом и векторов AAV

Мы получили библиотеки AAV со штрих-кодом ДНК, используя метод трансфекции плазмид, свободных от аденовирусов, и очистили их с помощью двух циклов ультрацентрифугирования хлорида цезия ^55,56 . Мы трансфицировали клетки HEK293 15 мкг каждой плазмиды клона библиотеки AAV (то есть либо pAAV-Serotype-x-VBC-y, pAAV9-SBBANN-AA-x-VBC-y, либо pAAV2R585E-SBBXEB-HP-x-VBC- y) вместе с 15 мкг pHelper (Stratagene) в отдельных 15-сантиметровых чашках методом трансфекции фосфатом кальция.Через 48 часов после трансфекции мы собрали клетки и ресуспендировали их в 1 мл буфера для клеточной суспензии (50 мМ Tris – HCl (pH 8,5), 2 мМ MgCl ₂ ) в отдельных пробирках, выполнили три цикла замораживания и оттаивания. и получили отдельные неочищенные клеточные лизаты. Мы смешали 10 мкл каждого неочищенного клеточного лизата, который должен содержаться в библиотеке, и сделали пул сырых лизатов. Мы извлекли ДНК вирусного генома из устойчивых к бензоназе (MERCK KGaA) частиц AAV и выполнили анализ AAV Barcode-Seq, как подробно описано в другом месте, для оценки относительного количества каждого вирусного клона в пуле.Мы использовали эту информацию, чтобы отрегулировать количество каждого неочищенного лизата, которое нужно смешать с большим пулом сырых лизатов; тем не менее, мы не производили обширных корректировок из-за относительной природы анализа AAV Barcode-Seq. Затем мы очистили этот более крупный пул сырых лизатов с помощью нашей стандартной процедуры очистки вектора AAV, основанной на двух циклах ультрацентрифугирования хлорида цезия ^55,56 . Полученными агентами были фонды библиотеки AAV, использованные в исследовании. Каждые вирусные клоны AAV были смешаны с каждой из семи библиотек, как показано в таблице 1.Что касается AAV9-AA-VBCLib, мы разделили мутанты AAV9 AA на четыре AAV9-AA-VBCLib таким образом, что 119 мутантов AAV9 AA, образующих капсид, были проанализированы дважды в двух разных библиотеках. Мы получили и очистили одноцепочечный AAV-CMV-lacZ и двухцепочечный (ds) AAV-CMV-GFP векторы, упакованные с разными серотипами и мутантными капсидами ^44,57 , используя стандартный метод трехплазмидной трансфекции с последующими двумя циклами ультрацентрифугирование хлорида цезия ^55,56 .

Титры частиц AAV, устойчивых к ДНКазе I,

определяли количественным методом дот-блоттинга с использованием генного зонда AAV2 rep .Относительный выход продукции вирусных частиц каждого серотипа или мутантного AAV определяли, как подробно описано в дополнительных методах. Как описано в основном тексте, 72 из 191 мутанта AA не продуцировали вирусные частицы AAV, достаточные для последующих анализов. Из 125 HP сканирующих мутантов AAV2R585E следующие 8 мутантов, 459-00700, 461-00700, 463-00700, 469-16000, 471-16000, 473-00009, 473-16000 и 591-00009 показали снижение> 95%. в продукции вирусных частиц AAV по сравнению с AAV2R585E.Следовательно, эти 72 мутанта AAV9 и 8 мутантов AAV2R585E были исключены из последующих фенотипических анализов. В AAV-Serotype-VBCLib мы потеряли значительный титр клонов AAV4 во время производства библиотеки AAV; поэтому AAV4 был исключен из последующих фенотипических анализов.

Эксперименты на животных

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящими принципами по уходу за животными Питтсбургского университета и Орегонского университета здоровья и науки. Мы использовали мышей-самцов C57BL / 6 в возрасте 8 недель и мышей-самцов C57BL / 6 Rag1 — / -, приобретенных в лаборатории Джексона.Мы случайным образом распределили каждое животное в каждую экспериментальную группу без учета массы тела животных. В исследованиях AAV Barcode-Seq мы вводили мышам C57BL / 6 библиотеки AAV внутривенно в дозе 1 × 10 ¹² мкг на мышь для оценки эффективности тканевой трансдукции и в дозе 1 × 10 ¹³ мкг. на кг для фармакокинетических исследований ⁴⁴ . Чтобы иммунизировать мышей C57BL / 6 с помощью AAV1 или AAV9, мы вводили мышам внутривенно 1 × 10 ¹¹ мкг на мышь вектора AAV-CMV-lacZ, упакованного с капсидом AAV1 или AAV9, соответственно.Мы использовали n = 2 или 3 на библиотеку в исследованиях AAV Barcode-Seq, как подробно описано в дополнительных данных 1, 2 и 3. Этот размер выборки был оправдан статистической мощностью анализа AAV Barcode-Seq, как показано в дополнительных Рис. 2. Для проверки результатов AAV Barcode-Seq и исследования тканевого тропизма и эффективности трансдукции каждого мутанта мы вводили 8-недельным самцам мышей C57BL / 6 и самцам мышей C57BL / 6 Rag1 — / — с AAV-CMV- lacZ вектор, упакованный с представляющими интерес капсидами AAV внутривенно в двух дозах, 3 × 10 ¹¹ и 1 × 10 ¹² мкг на мышь.Для этого валидационного исследования мы использовали n = 3 на группу. Мы умерщвляли инъецированных вектором мышей C57BL / 6 и мышей C57BL / 6 Rag1 — / — через 11 дней и 6 недель после инъекции, соответственно, для определения эффективности трансдукции в следующих 12 основных органах: мозг, сердце, легкие, печень, почки. , селезенка, кишечник, поджелудочная железа, яички, скелетные мышцы задних конечностей, висцеральная жировая ткань и дорсальная кожа. Все эксперименты на животных проводились без ослепления.

Анализ AAV Barcode-Seq

Мы экстрагировали общую ДНК из культивируемых клеток и тканей с использованием набора Nucleospin Tissue Kit (MACHEREY-NAGEL, Duren, Германия) или фенол-хлороформом.Мы использовали 100 нг тотальной ДНК для ПЦР-амплификации lt- и rt-VBC (то есть VBC-PCR). Мы экстрагировали вирусную ДНК из запасов библиотеки AAV с помощью набора для экстракции ДНК Wako (Wako Chemicals, Ричмонд, США) и использовали молекулы вирусной ДНК, эквивалентные 1-2 × 10 ⁸ частицам для VBC-PCR. Для образцов крови мы амплифицировали VBC непосредственно из крови без извлечения ДНК с использованием буферов для лизиса и нейтрализации, которые поставляются с набором для ПЦР крови Extract-N-Amp (Sigma, Сент-Луис, США). Для ПЦР использовали 0,1 мкл цельной крови.Это количество дало нам сигналы ПЦР, достаточные для последующего анализа, и было определено эмпирически. Праймеры ПЦР, которые мы использовали для амплификации lt- и rt-VBC, следующие: lt-VBC-For (FSN-SBC-ACCTACGTACTTCCGCTCAT), lt-VBC-Rev (FSN-SBC-TCCCGACATCGTATTTCCGT), rt-VBC-For (FSN-SBC-ACGGAAATACGATGTCGGGA) и rt-VBC-Rev (FSN-SBC-CTTCTCGTTGGGGTCTTTGC). Каждый праймер имел штрих-код, специфичный для образца (SBC) длиной 3–4 нуклеотида, и 0–4 нуклеотида со сдвигом рамки считывания (FSN) на 5′-конце. Мы включили SBC для мультиплексного секвенирования Illumina и FSN для преодоления проблемы низкого разнообразия последовательностей продуктов ПЦР при построении эталонных изображений ⁵⁸ .Циклы ПЦР, используемые для VBC-PCR, составляли 2 мин при 95 ° C, 35 циклов по 15 с при 95 ° C и 30 с при 68 ° C, а затем 5 мин при 68 ° C. Мы количественно оценили каждый продукт ПЦР с помощью электрофореза в агарозном геле с последующей денситометрией ДНК, окрашенной бромидом этидия. Затем мы объединили до 96 мультиплексированных продуктов ПЦР в эквимолярном соотношении и выполнили секвенирование Illumina, как подробно описано в дополнительных методах. Мы оценили качество считывания необработанных последовательностей Illumina с помощью FastQC (http: //www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/). Следующие меры качества, то есть качество базовой последовательности, оценка качества последовательности, содержание основания N и распределение длин последовательностей, были выполнены во всех наборах данных, которые мы использовали в этом исследовании. Мы извлекли данные о порядковых номерах чтения каждого lt- и rt-VBC в каждом образце из файлов Fastq Illumina. Для этого мы разработали алгоритм биннинга последовательностей, считываемых SBC, а затем lt- и rt-VBC, и реализовали его на Perl в Питтсбургском суперкомпьютерном центре.

При анализе образца AAV Barcode-Seq мы определили PD ( x _i , y _k ), что указывает на фенотипическое различие между штаммом AAV x _i (AAV x _i ) и эталонный контрольный штамм y _k (AAV y _k ), содержащиеся в библиотеке AAV, на основе номеров считывания последовательности Illumina .Для определения PD ( x _i , y _k ) мы определили следующие функции: RNLS_lt_VBC ( x _ij ), RNLS_rt_VBC ( x _ij ), RNES_lt_VBC ( x _ij , n ), RNES_rt_VBC ( x _ij , n ), R82R_ _ij , n ), RR_rt_VBC ( x _ij , n ), GNR_lt_VBC ( x _ij , y 900 k82 _{, y 900 k82 , n ) и GNR_rt_VBC ( x ij , y k , n ) ( i {1, 2 ,…, N 1 }, j {1, 2,…, N 2 ,…, N 3 }, k {1, 2} и n {1, 2,… , N 4 }). В x ij , i и j относятся к штаммам AAV и клонам AAV того же штамма AAV, соответственно. y k представляет контрольные штаммы AAV и принимает только два значения; AAV y 1 = AAV9 и AAV y 2 = AAV2R585E.В этих функциях RNLS, RNES, RR, GNR и PD обозначают число считываний в библиотеке, число считываний в экспериментальной выборке, исходное соотношение, глобально нормализованное соотношение и фенотипическое различие, соответственно; N 1 — количество штаммов AAV, содержащихся в библиотеке AAV; N 2 — количество клонов AAV, полученных из одного и того же AAV x i ( i ≥3) в библиотеке; N 3 — максимальное количество клонов AAV, представляющих один и тот же штамм AAV, которое совпадает с количеством клонов контрольных образцов; N 4 — количество повторов.AAV x 1 j и AAV x 2 j представляют контрольные контрольные клоны AAV9 и AAV2R585E соответственно. Например, AAV9-AA-VBCLib-1 (таблица 1) содержит 15 контрольных контрольных клонов AAV9, 15 контрольных контрольных клонов AAV2R585E и 184 мутантных клона AAV9, представляющих 92 различных мутанта AAV9 (то есть по 2 клона на мутант). Следовательно, N 1 , N 2 , N 3 и количество комбинаций ij этой библиотеки составляет 94, 2, 15 и 214 соответственно; AAV x 1 j ( j {1, 2 ,…, 15}) являются клонами AAV9; AAV x 2 j ( j {1, 2, …, 15}) являются клонами AAV2R585E, а AAV x ij ( i {3, 4 ,. .., 94}, j {1, 2}) представляют собой мутантные клоны AAV9.}

RNLS_lt_VBC ( x _ij ) и RNLS_rt_VBC ( x _ij ) представляют собой порядковые номера чтения lt-VBC для AAV x
i _{x 9007 x 9007 ij компании Illumina RT-VBC AAV x ij соответственно.Эти числа представляют собой запас библиотеки AAV, использованный в серии повторных экспериментов. RNES_lt_VBC ( x ij , n ) и RNES_rt_VBC ( x ij , n ) — это порядковые номера чтения lt-VBC для AAV10 x компании Illumina. ij и те из rt-VBC AAV x ij , соответственно, представляя образец, полученный из реплицированного экспериментального набора « n », который использует тот же запас библиотеки AAV.Если эксперимент проводится в трех экземплярах (экспериментальные наборы 1, 2 и 3), каждому экспериментальному набору присваивается n = 1, 2 или 3. С этими значениями мы вычислили RR_lt_VBC ( x ij , n ) и RR_rt_VBC ( x ij , n ) по следующим формулам (1, 2) :}

GNR_lt_VBC ( x _ij , y _k , n ) и GNR_rt_VBC ( x _ij
6, y k82
81, y , n ) глобально нормализованы RR_lt_VBC ( x _ij , n ) и RR-rt_VBC ( x _ij , n ) соответственно, когда для сравнения выбран эталонный контроль AAV y _k .Мы вычислили GNR_lt_VBC ( x _ij , y _k , n ) и GNR_rt_VBC ( x _ij , y _{, y , y , y , n ), используя следующие формулы (3, 4):}

Обратите внимание, что No_lt ( x _k , n ) и No_rt ( x _k , n ) — это количество выбросов в значениях RR_lt_VBC и RR_rt_VBC контрольных элементов управления (то есть AAV x ₁ или AAV x ₂ ), идентифицированных на основе трехкратного увеличения межквартильный размах.Поэтому, когда выбросы были удалены, количество элементов суммирования в приведенной выше формуле было меньше на количество выбросов.

Затем мы вычислили PD ( x _i , y _k ) ( i ≥3), которое представляет собой среднее значение GNR_lt_VBC и GNR_rt_VBC , используя следующая формула (5):

No ( x _i , y _k ) — количество выбросов в значениях GNR_lt_VBC и GNR_rt_VBC деформаций AAV, кроме эталонные контроли (AAV x _i , i ≥3), идентифицированные на основе трехкратного межквартильного размаха.Следовательно, когда выбросы были удалены, количество элементов суммирования в приведенной выше формуле было меньше на количество выбросов, идентифицированных в каждом наборе данных GNR_lt_VBC и GNR_rt_VBC . Таким образом, значения PD для контрольных элементов управления (то есть PD ( x ₁ , y ₁ ) и PD ( x ₂ , y ₂ )) всегда остаться 1. Следовательно, PD ( x _i , y _k ) обеспечивает «кратное увеличение» значений AAV x _i по сравнению с контрольным элементом AAV y _к .В реальном эксперименте мы всегда получали номера считывания последовательности Illumina из трех независимых наборов ампликонов для ПЦР lt- и rt-VBC из фондов библиотеки AAV, в то время как мы получали только один набор ампликонов для ПЦР lt- и rt-VBC из образцов. Поэтому мы вычислили GNR_lt_VBC ( x _ij , y _k , n ) и GNR_rt_VBC ( x _ij , y 900 k82 , n ) с использованием каждого из трех наборов данных запаса библиотеки AAV и средними значениями трех наборов GNR_lt_VBC ( x _ij , y _k , n ) и GNR_rt_VBC ( x _ij , y _k , n ) для определения PD ( x _i , y _к ).

Все значения PD были статистически оценены с помощью двустороннего критерия Манна-Уитни U и присвоено значение P для каждой комбинации мутант-фенотип, как подробно описано в подразделе «Статистический анализ» в Методах. Значения PD, показывающие четырехкратное увеличение или уменьшение с P ≥0,05 из-за значительной степени разброса данных, не использовались для оценки взаимосвязи мутации и фенотипа. Мы установили значение, которое отличает мутантов, показывающих значительное снижение значений PD, от других в следующих фенотипах, чтобы интерпретировать данные.Мы приняли снижение на> 90% для трансдукции печени,> на 80% для связывания клеток СНО и трансдукции клеток СНО и> 90% для снижения фармакокинетических свойств LP. Хотя можно рассмотреть более высокое или более низкое значение, эти пороговые значения могут обеспечить значимую интерпретацию данных, как показано в разделе «Результаты».

Анализы тканевой трансдукции

Мы определили эффективность тканевой трансдукции у мышей, которым инъецировали вектор AAV-CMV-lacZ, с помощью окрашивания X-Gal, анализа саузерн-блоттинга и / или количественной ПЦР.Вкратце, мы гистологически определили эффективность трансдукции в печени путем ручного подсчета X-Gal-положительных и отрицательных клеток, а также в сердце путем анализа изображений с использованием программного обеспечения MetaMorph ⁴⁴ . Мы определили количество копий генома вектора AAV в печени с помощью саузерн-блоттинга ⁴⁴ и копий в непеченочных тканях с помощью кПЦР. В некоторых образцах печени количество копий векторного генома определяли с помощью кПЦР. Для анализа кПЦР мы смешали 100 нг тотальной ДНК с реагентами Power SYBR Green Master Mix и праймерами для ПЦР (по 10 пмоль на реакцию) в общем объеме 25 мкл и провели кПЦР с использованием Rotor-Gene Q.Мы амплифицировали последовательность промотора CMV и последовательность гена агути мыши для количественной оценки и нормализации векторного генома соответственно. Что касается стандартов количества копий, мы использовали суперспиральные кольцевые плазмиды, содержащие каждую из целевых последовательностей ПЦР. Последовательности праймеров для qPCR следующие: CMV-P прямой (5′-TGGGAGTTGTTTTGCACCAA-3 ‘), CMV-P обратный (5′-CGCCTACCGCCCATTTG-3′), Mouse-agouti forward (5′-GGCGTGGTCAGTG-3’TG) Мышь-агути обратная (5’-TTTAGCTTCCACTAGGTTTCCTAGAAA-3 ‘). Количество копий векторного генома выражали как количество копий двухцепочечного векторного генома на диплоидный геномный эквивалент.

Биоинформатика и компьютерное моделирование капсидов AAV

Мы собрали информацию о нуклеотидных последовательностях 128 штаммов AAV из GenBank и рассчитали оценки эволюционной консервации с помощью ConSurf с параметрами по умолчанию ^58,59 . Мы получили трехмерные структурные координаты капсидов AAV2 и AAV9 из банка данных по белкам (1lp3 и 3ux1 для AAV2 и AAV9, соответственно). С этими координатами мы сгенерировали олигомеры капсидов AAV2 и AAV9, содержащие девять субъединиц или полных капсидов, с использованием генератора олигомеров VIPERdb ⁶⁰ и визуализировали их с помощью PyMOL.Мы определили топологическое расположение каждой аминокислоты капсида в третичной и четвертичной структуре путем визуального осмотра структурной модели капсидов AAV, визуализированной на поверхности, с использованием PyMOL.

Статистический анализ

Мы оценили фенотипические различия между AAV x _i и AAV y _k с помощью двустороннего теста Манна – Уитни U . Мы использовали непараметрический тест, потому что тест Шапиро-Уилка на нормальность показал, что набор данных GNR , с помощью которых был определен PD ( x _i , y _k ) (то есть GNR_lt_VBC ( x _ij , y _k , n ) и GNR_rt_VBC ( x _ij , y _k , y _k ) значения) не обязательно подчиняются нормальному распределению.Чтобы оценить корреляцию между двумя фенотипами, мы использовали тест × ² или точный критерий Фишера. Мы применили подход Монте-Карло для определения статистической мощности анализа штрих-кода-Seq. Вкратце, мы получили фактический набор данных числа считываний Illumina, содержащий 100 различных клонов AAV9 AAV x _{1 j} ( j {1, 2, …, 100}) из образцов печени, полученных из трем мышам инъецировали библиотеку AAV-Serotype-VBCLib. Затем мы вычислили GNR_lt_VBC ( x _{1 j} , y ₁ , n ) и GNR_rt_VBC ( x _{1 j} , y ₁ , y ₁ , n ) ( j {1, 2 ,…, 100} и n ∈ {1, 2, 3}) и сгенерировал набор данных GNR, содержащий 100 (клоны AAV9) × 2 (lt- и rt-VBC) × 3 (мыши) = 600 GNR_lt_VBC и Значения GNR_rt_VBC . Используя этот набор данных GNR, мы смоделировали следующие 7 наборов данных, показывающих 0,125-, 0,25-, 0,5-, 1-, 2-, 4- и 8-кратное увеличение путем умножения каждого GNR_lt_VBC ( x _{1 j} , y ₁ , n ) и GNR_rt_VBC ( x _{1 j} , y ₁ , n ) на соответствующий коэффициент увеличения кратности.Затем мы случайным образом выбрали no_of_ref эталонных клонов AAV из набора данных GNR с однократным увеличением ( no_of_ref {3, 4, 5,…, 24}) и 2 клона AAV из каждого из 0,125-, 0,25-, 0,5-, 1-, 2-, 4- и 8-кратные наборы данных GNR от двух или трех мышей, а также статистическая оценка различий в этих двух выбранных наборах данных с помощью двустороннего теста Манна-Уитни U . Мы выполнили это моделирование 500 раз и определили статистическую мощность анализа для обнаружения каждого из 0.125-, 0,25-, 0,5-, 1-, 2-, 4- и 8-кратные изменения с P < 0,05 (двусторонний критерий Манна-Уитни U ). Мы также выполнили такой же анализ мощности с использованием случайно отобранных наборов данных, сгенерированных из наборов данных числа считывания Illumina для секвенирования 100 различных клонов AAV9 x _{1 j} , описанных выше. Статистические алгоритмы были разработаны и реализованы на Perl с модулями CPAN в Питтсбургском суперкомпьютерном центре. Мы использовали все значения без исключения для исследований моделирования, которые подтвердили анализ AAV Barcode-Seq.Для оценки фактических экспериментальных данных, полученных с помощью анализа AAV Barcode-Seq, мы исключили выбросы, показывающие значения более чем в три раза превышающие межквартильный диапазон за пределами верхнего и нижнего квартилей.

Кластерный анализ

В иерархическом кластерном анализе мы использовали манхэттенское расстояние и метод полной связи. Мы использовали R ⁶¹ для вычислений и графического вывода.

Проведение параллелей между развитием и раком

Abstract

Важность канонических и неканонических каскадов передачи сигналов Wnt в эмбриональном развитии и тканевом гомеостазе хорошо известна.Аберрантная активация этих путей у взрослого человека приводит к аномальному поведению клеток, и часто следствием этого является прогрессирование опухоли. Здесь мы обсуждаем недавние находки и аналогии между передачей сигналов Wnt в процессах развития и прогрессированием опухолей, с особым акцентом на подвижность клеток и инвазию матрикса и подчеркиваем роль ARF (ADP-Ribosylation Factor) и малых GTP-связывающих белков семейства Rho. Регулируемая Wnt передача сигнала от рецепторов клеточной поверхности, сигнальных эндосом и / или внеклеточных везикул может глубоко влиять на перемещение клеток, деградацию матрикса и паракринную передачу сигналов как при развитии, так и при заболевании.

Ключевые слова: Wnts, подвижность клеток, клеточная инвазия, рак, развитие, малые GTP-связывающие белки

1. Введение

Потеря нормальной полярности и адгезии клеток, наряду с приобретением подвижности и инвазивности, являются фундаментальными шаги во время прогрессирования опухоли и метастазирования. Процесс метастазирования, при котором клетки распространяются из опухоли и растут в отдаленных местах, остается крупнейшим фактором смертности от рака [1,2]. Нарушение регуляции многих сигнальных путей, включая передачу сигналов Wnt, вносит вклад в это поведение.Wnts хорошо охарактеризованы для критических функций во время нормального эмбриогенеза и тканевого гомеостаза, регулируя такие процессы, как подвижность клеток, адгезия, инвазия, формирование паттерна ткани и пролиферация [3,4]. Однако аберрантная передача сигналов Wnt у взрослых часто приводит к аномальному клеточному поведению, прогрессирующему до начала заболевания. Многие аспекты передачи сигналов Wnt были подробно рассмотрены в литературе, и здесь мы описываем известные и предсказанные параллели между Wnt-опосредованной регуляцией нормального эмбрионального и тканевого гомеостатического поведения и аномальной активацией этих путей при прогрессировании рака, с особым акцентом на опухоли. подвижность клеток и инвазия.Wnt-опосредованная регуляция динамики сигнальных эндосом, внеклеточных везикул и инвадоподий обладает способностью влиять на инвазию опухолевых клеток и деградацию внеклеточного матрикса. Мы обсуждаем недавние открытия о роли канонических и неканонических путей Wnt и передачи сигналов, опосредованной малыми GTPase, в модуляции этих процессов и намечаем нерешенные пробелы в этой области, которые заслуживают дальнейшего изучения.

2. Каноническая и неканоническая передача сигналов Wnt — обзор

В настоящее время идентифицировано девятнадцать лигандов Wnt как для канонических, так и для неканонических осей передачи сигналов, при этом некоторые лиганды действуют через оба пути [5,6].Рецепторы Wnt LRP5 и LRP6, наряду с десятью членами семейства Frizzled (Fzd) рецепторов, связанных с G-белком, опосредуют канонические пути передачи сигналов [7,8]. ROR1, ROR2 (рецепторные тирозинкиназы) и RYK (рецептор-подобная тирозинкиназа) действуют как альтернативные рецепторы Wnt в неканонических сигнальных путях, хотя эта передача сигнала может также модулировать каноническую передачу сигнала [5,9,10,11]. Большое количество лигандов и рецепторов Wnt потенциально допускает большое разнообразие исходов передачи сигналов [5].

Клеточные процессы, модулируемые Wnts, варьируются от самообновления стволовых клеток до подвижности клеток и опосредуются активацией транскрипции, а также прямым воздействием на цитоплазматические мишени [3,12]. β-catenin является критическим компонентом многих путей Wnt и действует как белок межклеточной адгезии, а также как внутриклеточная сигнальная молекула [13,14]. Цитоплазматический β-катенин обычно разрушается в протеасоме после фосфорилирования комплексом деструкции, который состоит из аденоматозного полипоза кишечной палочки (APC), Axin 1/2, казеинкиназы I (CKI) и киназы гликогенсинтазы 3β (GSK3β) и последующее убиквитинирование белком, содержащим повторы β-трансдуцина (β-Trcp).Wnts являются наиболее известными ингибиторами этой деградации. Лиганды Wnt активируют каноническую передачу сигналов путем связывания рецепторов Fzd и LRP5 / 6 на поверхности клетки, а фосфорилирование LRP опосредует рекрутирование аксина и его последующую инактивацию, вызывая диссоциацию комплекса деструкции и высвобождая β-катенин для перемещения в ядро ​​[4 , 15] (). Ядерный β-катенин действует как коактиватор транскрипции для множества нижестоящих мишеней транскрипционных факторов семейства TCF / LEF, влияя на транскрипцию генов-мишеней, которые регулируют большой и разнообразный набор клеточных процессов, включая апоптоз, метаболизм, пролиферацию и т. Д. подвижность, развитие клеточного цикла и дифференцировка [16,17].

Канонические и неканонические пути Wnt влияют на миграцию и инвазию клеток. Активация Wnt может вызвать активацию нескольких нижестоящих сигнальных путей, избранные примеры которых показаны здесь. Каноническая передача сигнала Wnt приводит к диссоциации «комплекса разрушения» и стабилизации цитоплазматического β-catenin, который затем перемещается в ядро, чтобы регулировать транскрипцию нижестоящих мишеней. Каноническая передача сигналов Wnt, как было показано, стимулирует активность ARF6, которая, в свою очередь, способствует интернализации транскрипционно активного β-catenin из сайтов адгезии на основе кадгерина.Неканонические сигнальные каскады способствуют активации малых GTPases Rac1, RhoA и Cdc42, чтобы способствовать ремоделированию цитоскелета, необходимому для инвазии и миграции клеток, а также JNK для регулирования дополнительных мишеней транскрипции.

Неканоническая передача сигналов Wnt, которая не зависит от транскрипционной активности β-катенина, охватывает множественные каскады передачи сигналов, которые передают сигнал через Fzd; Альтернативные рецепторы Fzd ROR1, ROR2 или RYK; или, возможно, через Fzd с ROR или RYK в качестве корецепторов [5,7,9,10,18].В неканонической передаче сигнала задействованы несколько нижестоящих эффекторов, включая кальмодулин / кальций, протеинкиназу C (PKC), гетеротримерные G-белки, Src, JNK и несколько малых GTPases [19].

Из неканонических путей лучше всего охарактеризован путь планарной полярности клеток (PCP), который влияет на различные процессы развития и болезни [20,21,22]. Из девятнадцати идентифицированных лигандов Wnt семь охарактеризованы как работающие в неканонических путях [23], причем Wnts 4, 5a и 11 как лучше всего охарактеризованы для влияния на передачу сигналов PCP.Передача сигналов PCP важна для движения поляризованных клеток и равномерного выравнивания полярности клеток и формирования паттерна во время формирования ткани [12,21,24,25,26,27,28]. Таким образом, передача сигналов PCP является ключевой во время миграции нервного гребня [27], когда клетки должны мигрировать из тыльной части нервной трубки после перехода эпителия в мезенхиму и перемещаться к своему конечному пункту назначения, где они будут дифференцироваться в широкий спектр клеток. от хряща до нейронов и меланоцитов [29]. Эта миграция происходит в сильно поляризованных клеточных потоках, которые формируются присутствием отрицательных сигналов из окружающей среды [27].Передача сигналов PCP, как было установлено, регулирует дополнительные, разнообразные формы поведения в процессе развития, включая гаструляцию позвоночных [24,28], закрытие нервной трубки [25], установление нормальной функции ресничек [26] и планарную ориентацию деления клеток [24].

3. Передача сигналов Wnt при раке — обзор

В то время как каноническая и неканоническая регуляция активностей Wnt, таких как дифференцировка, адгезия, морфология клеток и подвижность, имеет решающее значение для нормального развития эмбриона [3,13], аберрантная передача сигналов через Wnt пути могут способствовать развитию и прогрессированию рака [13,19,22,30,31].Роль Wnt в развитии рака была первоначально идентифицирована, когда было обнаружено, что онкогенный вирус опухоли молочной железы мышей (MMTV) часто интегрируется в конкретную область генома, затем названный MMTV int1 [32], а затем было обнаружено, что он кодирует первый идентифицированный Wnt, позже будет называться Wnt1 [33]. Сильная связь передачи сигналов Wnt при раке человека была идентифицирована, когда была отмечена корреляция между мутациями β-catenin регуляторного белка APC и семейным аденоматозным полипозом, который приводит к значительному увеличению заболеваемости колоректальным раком [13,34,35].Мутации APC в настоящее время охарактеризованы примерно в 80% спорадических опухолей толстой кишки [36,37] и реже при раке других тканей, таких как грудь, желудок и легкие [19,38,39,40]. Мутации в самом β-катенине также часто обнаруживаются в опухолях печени, гипофиза, эндометрия, поджелудочной железы и некоторых раках яичников, с большим количеством мутаций в областях, которые предотвращают его деградацию [19,41,42]. Мутация белка комплекса деструкции Axin также распространена, что отмечается при различных формах рака, включая медуллобластому, меланому, аденоидно-кистозную карциному и рак печени [19,43].

Важно отметить, что Wnts не всегда способствуют прогрессированию опухоли и могут выполнять онкогенные или опухолевые супрессивные роли в зависимости от клеточного контекста. Примером этого является Wnt5a, который, как было показано, коррелирует с плохим прогнозом и способствует инвазии опухолевых клеток при меланоме, глиоме, раке поджелудочной железы, простаты и желудка [44,45,46,47,48,49], однако при раке груди. , Wnt5a лучше охарактеризован как опухолевый супрессор [50,51,52].

4. Малые GTPases в Wnt-регулируемой клеточной подвижности и инвазии: параллели между развитием и раком

4.1. Консервативное поведение клеток: подвижность и вторжение в развитие и болезнь

Существует много очевидных сходств между нормальным поведением клеток во время эмбриогенеза и опухолевыми клетками во время инвазии и метастазирования. Генетические мутации, которые разрушают эмбриональные сигнальные модули, часто характеризуют развитие рака. Например, существует много параллелей между поведением мигрирующих клеток нервного гребня в развивающемся эмбрионе и инвазивных опухолевых клеток, мигрирующих во время метастазирования во вторичный сайт.Меланома, наиболее часто смертельный рак кожи, является одним из таких примеров [53]. Одной из характеристик прогрессирующей меланомы является агрессивная тканевая инвазия [54], напоминающая активность, которую меланоциты, происходящие из нервного гребня, проявляют во время развития, поскольку клетки должны перемещаться через дерму, чтобы колонизировать кожу и волосяные фолликулы [29].

Регуляция такой клеточной подвижности и инвазии сложна и многогранна, и клетки могут использовать качественно различные способы передвижения, чтобы преодолевать расстояния [55,56].Это различное подвижное поведение наблюдается во время эмбриогенеза и ремоделирования тканей, и опухолевые клетки могут использовать аналогичные механизмы. В клетках с округлой или амебоидной морфологией актомиозин в кортексе клетки сокращается в направлении желаемого потока. С другой стороны, клетки, приобретающие уплощенную или мезенхимальную морфологию, обычно образуют передний край, который расширяет богатые актином выступы, такие как ламеллиподии, наряду с адгезивным взаимодействием с субстратом, за которым следует втягивание задней части сократительной клетки для достижения клеточного движения [56, 57].Организация цитоскелета, необходимая для амебоидного и мезенхимального движения, регулируется селективной активацией или подавлением семейств Rho и ARF суперсемейства Ras малых GTPases, как описано ниже. Как канонические, так и неканонические сигнальные каскады Wnt пересекаются с этими регуляторными молекулами, чтобы влиять на подвижное поведение [27,31,58,59] ().

4.2. Роль Rac1 и RhoA в Wnt-опосредованной подвижности и инвазии клеток

Внутриклеточная передача сигналов, опосредованная малыми GTPases Rac1 и RhoA, играет ключевую роль в опосредовании активности Wnt в подвижности клеток во время развития, регулируя образование клеточных выступов и направленную миграцию [12,58 ].Rac и Rho могут напрямую влиять на перестройки актина, а также способствовать активации JNK, чтобы в дальнейшем изменять динамику цитоскелета и транскрипцию генов во время нескольких процессов развития [8,18]. В эмбриональном развитии активность Rac1 была охарактеризована как важная для канонической передачи сигналов Wnt ниже Wnt3a и необходима для транслокации β-catenin в ядро ​​[60]. В этом отношении мутация сайтов фосфорилирования JNK2 β-катенина по Ser191 и Ser605 отменяет активацию Rac1.Во время миграции нервного гребня Rac1 активируется на переднем крае клетки, способствуя полимеризации актина для выпячивания клеток, при этом RhoA активируется на втягивающейся задней части клетки, чтобы способствовать сократимости актомиозина [27]. Ингибирование межклеточного контакта при столкновении потоковых клеток стимулируется активностью RhoA с сопутствующим подавлением Rac1, что способствует сокращению клеточных выступов [27].

При связывании Wnt с рецептором Fzd цитоплазматический Disheveled (Dvl) активирует формин Disheveled Associated Activator of Morphogenesis 1 (Daam1), облегчая образование комплекса между Daam1, Dvl и Rho, тем самым облегчая активацию Rho и последующую Активность киназы Rho [21].Чтобы способствовать образованию клеточных выступов на переднем крае клетки, активность Rac1 и JNK также может усиливаться с помощью Dvl, чтобы облегчить ремоделирование актина [21,61]. В направленном движении клеток нервного гребня у эмбрионов Xenopus и рыбок данио, Rac1 и RhoA-опосредованная регуляция клеточных выступов также важна. В этом контексте протеогликан Syndecan-4, который необходим для направленной миграции клеток нервного гребня, подавляет активацию Rac1, чтобы контролировать направление развития выпячивания клеток [62].В этом процессе PCP-опосредованная активность RhoA ингибирует Rac1, чтобы регулировать направленную миграцию.

В ходе развития эмбриональные клетки принимают различные морфологии для миграции во время организации тканей, и это также наблюдается во взрослых тканях во время событий заживления и регенерации [31,63,64]. Антагонистическая взаимосвязь между передачей сигналов Rac1 и RhoA была хорошо охарактеризована для регулирования мезенхимальных и амебоидных режимов подвижности [55,65], и пример такого поведения наблюдается во время гаструляции рыбок данио, когда мезодермальные клетки должны переходить от амебоидной подвижности к мезенхимальной. движение, а затем, наконец, в поляризованное выравнивание [66].Это опосредуется RhoA, который способствует ингибирующему фосфорилированию миозинфосфатазы для регулирования протрузивной активности актомиозина. В контексте регенерации ткани скелетных мышц активация Rho и JNK, которая, как полагают, осуществляется посредством неканонической передачи сигналов Wnt, важна для движения пузырей, используемого сателлитными клетками, резидентной популяцией стволовых клеток в скелетных мышцах [63]. Напротив, в миграции фибробластов и эпителиальных клеток важен мезенхимальный способ передвижения, регулируемый с помощью Rac1 через Wnt5a [31].

Амебоидный и мезенхимальный режимы подвижности также используются опухолевыми клетками, поскольку они перемещаются во внеклеточной среде. Изменение морфологии и подвижности клеток является ключевым моментом в ходе клеточной инвазии и метастазирования, поскольку клетки сталкиваются с различными барьерами внеклеточного матрикса на пути к вторичному сайту. Rac1 имеет ряд хорошо охарактеризованных функций в движении как нормальных, так и опухолевых клеток, которые традиционно показаны как важные для полимеризации актина, чтобы управлять движением на основе ламеллиподий и формированием инвадоподий для облегчения протеолиза матрикса [57,67].В опухолевых клетках, вторгающихся в среду жесткого внеклеточного матрикса, была отмечена повышающая регуляция активности Rac1 и сопутствующее подавление RhoA [57], аналогично передаче сигналов, которая наблюдалась во время миграции нервного гребня [62]. Опухолевые клетки, вторгающиеся в более мягкую, более податливую среду внеклеточного матрикса, принимают округлую амебоидную морфологию. Эти клетки демонстрируют RhoA-опосредованную инактивацию миозинфосфатазы, чтобы способствовать сократимости на основе актомиозина, необходимой для высвобождения богатых протеазой инвазивных микровезикул с поверхности клетки [57], аналогично описанному выше механизму регуляции подвижности клеток во время гаструляции рыбок данио [66 ].Как амебоидный, так и мезенхимальный способы инвазии требуют восходящей активации небольшого GTP-связывающего белка ARF6 (описанного далее ниже), который вызывает активацию Rac1 или RhoA в зависимости от податливости внеклеточного матрикса [57] ().

Передача сигналов Wnt влияет на прогрессирование и инвазию опухоли. Клеточные изменения, регулируемые Wnt, включают облегчение диссоциации и интернализации адгезий на основе кадгерина (кубовидные клетки слева) и образование инвадоподий в мигрирующих опухолевых клетках (красный).Wnt также может быть включен в качестве груза во внеклеточные везикулы, высвобождаемые из амебоидных опухолевых клеток (оранжевый), а также других клеток, таких как фибробласты, в микроокружении опухоли (желтый). Небольшие GTP-связывающие белки семейств ARF и Rho, регулируемые различными белками, активирующими GTPase (GAP) и факторами обмена гуаниновых нуклеотидов (GEF), опосредуют многие из этих процессов.

Активность белков семейства Rho ниже Wnts при раке широко варьирует и, по-видимому, зависит от клеточного контекста.В модели колоректального рака было обнаружено, что RhoA действует как супрессор опухолей, при этом его инактивация необходима для канонической передачи сигналов ниже Wnt3a, чтобы способствовать метастазированию. Дальнейшее снижение уровней RhoA наблюдалось в местах метастазирования по сравнению с первичными поражениями [68]. Модель подвижности линии клеток яичников китайского хомячка, однако, обнаружила, что RhoA активируется с помощью Wnt3a, способствуя реорганизации актина и движению клеток совместно с Dvl2 [69]. В модели плоскоклеточного рака полости рта клетки, сконструированные для экспрессии β-катенина, в котором отсутствует весь сайт фосфорилирования GSK3β, показали накопление цитоплазматического и ядерного β-катенина и соответствующее увеличение активации Rac1 и Cdc24 с принятием веретенообразной удлиненной морфологии, потеря межклеточных контактов и повышенная инвазивность [70].Было показано, что во время прогрессирования гепатоцеллюлярной карциномы активность Rac1 способствует подвижности клеток, и этому может противодействовать активация киназы RhoA и Rho ниже активности Wnt [71]. В этом случае Wnt11 функционирует как опухолевый супрессор, активируя передачу сигналов PKC для фосфорилирования β-катенина, что приводит к снижению TCF-опосредованной транскрипционной активности и снижению пролиферации клеток.

4.3. Передача сигналов ARF6 и Wnt регулирует инвазию опухолевых клеток и формирование сигнальных эндосом

Небольшой GTP-связывающий белок ARF6 регулирует ранний перенос эндоцитозных мембран и перестройки актинового цитоскелета, частично за счет своего воздействия на метаболизм фосфоинозитидов [72].Мыши, гомозиготные по нулевому аллелю, демонстрируют эмбриональную и перинатальную летальность, начиная примерно с середины беременности, с нарушением образования печеночного канатика во время развития печени [73]. ARF6 часто сверхэкспрессируется при раке легких, молочной железы, предстательной железы и толстой кишки [74,75,76,77], и его активация связана с повышенной инвазией тканей и повышенным образованием инвадоподий и микровезикул, происходящих из опухоли, для облегчения движения через внеклеточный матрикс [75,78,79,80,81].

Меланома является ярким примером роли Wnts и ARF6 в опухолевой инвазии.Роль Wnt5a в прогрессировании меланомы посредством канонической и неканонической передачи сигналов была продемонстрирована [46,48], которая может модулироваться с помощью передачи сигналов ARF. Wnt5a, лучше всего охарактеризованный как неканонический сигнальный лиганд, как было показано, способствует инвазии меланомы PKC-зависимым образом, передавая сигналы через Fzd5 [48]. Кроме того, каноническая передача сигналов через Wnt5a, как было показано, способствует активации ARF6 и последующей инвазии меланомы за счет стимуляции опосредованной β-catenin транскрипционной активности [46].В этом случае Wnt5a активирует ARF6, стимулируя активность своего обменного фактора GEP100 через рецепторы Fzd4 и LRP6. Блокирование этого пути предотвращало метастазирование в легкие у мышей с опухолями ксенотрансплантата меланомы. В отдельном исследовании активности ARF6 и ARF1, как было показано, являются важными регуляторами Wnt3a-обеспечиваемой канонической передачи сигналов посредством генерации PIP2 и фосфорилирования LRP6 [82]. В этом случае активность ARF1 и ARF6 опосредована инактивацией белка, активирующего ГТФазу, ARFGAP [83].

Помимо своей роли в обеспечении структурного ремоделирования, способствующего приобретению инвазивных фенотипов, активация ARF6 также играет жизненно важную роль в распространении передачи сигналов Wnt посредством образования сигнальных эндосом [84,85] (). Сигнальные эндосомы — это уникальные популяции эндосом, которые служат платформой для надежного и долгоживущего распространения рецепторного сигнала, и множество грузов, включая MAP-киназы, различные рецепторы, связанные с G-белком, и рецепторные тирозинкиназы (RTK), такие как EGFR, были идентифицирован [86].В трехмерных культурах клеток базальной мембраны эпителиальных протоков активация ARF6, как было показано, способствует формированию сигнальных эндосом, содержащих рецепторы факторов роста, что приводит к гиперактивной передаче сигналов ERK и аберрантным фенотипам эпителиальных желез, напоминающим некоторые виды рака желез [84,85]. Стимуляция эпителиальных кист Wnt3a способствует активности ARF6 и последующему образованию сигнальных эндосом. Возникающая в результате гиперактивация ERK способствует CK2-зависимому фосфорилированию α-catenin, чтобы способствовать разборке адгезий на основе кадгерина и интернализации молекул адгезии, увеличивая цитоплазматический пул транскрипционно активного β-catenin [85].Гиперактивация ERK также приводит к повышенному фосфорилированию рецептора Wnt LRP6, что может способствовать дальнейшему усилению канонической передачи сигналов, вызывая диссоциацию комплекса деструкции и способствуя стабилизации β-катенина. Эти клеточные события завершаются заполнением железистых единиц, напоминающих патологии, наблюдаемые при протоковой карциноме in situ (DCIS). Вместе эти исследования подтверждают потенциальную роль сигнальных эндосом в передаче сигнала Wnt и прогрессировании рака.

4.4. Eph и передача сигналов эфрина регулируют малые GTPases в передаче сигналов Wnt

Другим семейством белков с возобновившейся значимостью при раке и которые регулируют Rho GTPases в передаче сигналов PCP в развитии и тканевом гомеостазе, являются эфрины и эфрины. Эфрины — это заякоренные в мембране белки, которые связывают рецепторы тирозинкиназы eph, чтобы стимулировать различные клеточные процессы, опосредованные реорганизацией актинового цитоскелета и клеточно-матриксных и межклеточных адгезий, как посредством прямой передачи сигналов в eph-экспрессирующей клетке, так и обратной передачи сигналов. в клетке, экспрессирующей эфрин [87,88].Во время развития сигналы отталкивания и притяжения от передачи сигналов эфрина помогают в управлении движением, прикреплением и морфологией клеток, опосредованных дифференциальной активацией Rac, Rho и Cdc42 [88,89,90,91,92]. Факторы обмена Rho Эфексин и Vms-RhoGEF преимущественно связываются с рецепторами EphA, чтобы способствовать активности Rho, тогда как GEF для Rac1 и Cdc42, Калирина и Интерсектина связываются с рецепторами EphB [89]. EphrinB1, как было показано, передает сигналы через путь PCP, взаимодействуя с Dvl, чтобы активировать Rho и JNK, требующие Daam1, чтобы регулировать миграцию клеток в развитии глаз Xenopus [93].Пример модуляции морфологии и прикрепления клеток эфрином наблюдается в клетках меланомы и эмбриональных почек человека, где активация EphA3 с помощью EphrinA5 активирует Rho, вызывая перестройку актомиозина, округление клеток, образование пузырей и отслоение [94]. Передача сигналов эфрина может подавлять или способствовать прогрессированию рака, и многие эфрины сверхэкспрессируются при раке [87,95]. Пример регуляции Wnt дифференциальной передачи сигналов эфрина при прогрессировании рака наблюдается при колоректальном раке.В этом контексте рецепторы EphB экспрессируются как мишени для Wnt, при этом EphB2 характеризуется как опухолевый супрессор, сдерживающий рост опухоли у мышей Apc ^{Min / +} [96,97], тогда как EphB4 способствует прогрессированию рака [98].

4.5. Регуляция малых GTPases в передаче сигнала Wnt — роль GAP и GEF

Важным для регуляции активации малых GTP-связывающих белков являются их факторы обмена гуаниновых нуклеотидов (GEF), которые облегчают активацию путем обмена GTP на GDP и активацию GTPase белки (GAP), которые способствуют гидролизу GTP, переводя белки в неактивное, связанное с GDP состояние [99].Многие пути передачи сигнала Wnt, которым помогают небольшие GTP-связывающие белки, как упомянуто в разделах выше, включают прямое нацеливание на GEF и GAP, и приведено несколько примеров этой регуляции.

Как упоминалось выше, существует множество GAP и GEF, которые регулируют активацию ARF в сигнальных каскадах Wnt. Активность GEF GEP100, стимулированная ниже связывания Wnt5a с Fzd4 и LRP6, способствовала активности ARF6 и последующему метастазированию в модели ксенотрансплантата меланомы [46]. ARFGAP, белок, который инактивирует ARF1 и ARF6, как было показано, является важным модулятором активности ARF ниже Wnt3a, регулируя фосфорилирование LRP6 и генерацию PIP2 [82].В случае Rho GTPases APC, как было показано, взаимодействует как с APC-стимулированным GEF (ASEF), так и с GEF для Rac1 и IQGAP1, GAP для Rac1 и Cdc42. И ASEF, и IQGAP1 важны для регуляции направленной миграции [100]. Активация Rac1 при стимуляции Wnt3a требует взаимодействия Rac1 GEF Vav2 с p120-catenin после высвобождения катенина из E-cadherin [59]. Кроме того, активация белков плоской клеточной полярности PTK7 (протеинтирозинкиназа 7), CELSR (семипроходный рецептор G-типа кадгерина EGF LAG) и VANG (типа Ван Гога) рецепторами Wnts или Fzd может поддерживать передачу сигналов PCP GTPase. путем набора Rac1 и Cdc42 GEF PAK, Rac1 GEF ARHGEF7 и ARF GAP GIT1 [19,20].

4.6. Внеклеточные везикулы и передача сигналов Wnt

В последние годы исследования внеклеточных везикул, таких как экзосомы и микровезикулы, выросли экспоненциально, в основном из-за их важности для переноса грузов во время нормальных клеточных процессов и при заболеваниях, а также их потенциальной полезности в качестве биомаркеров [ 101,102,103,104]. Формирование этих везикул регулируется множеством малых ГТФаз [57,78,104,105], и они обогащены множеством грузов, которые могут способствовать прогрессированию рака, такими как нуклеиновые кислоты и онкогенные рецепторы, которые могут быть переданы клеткам-реципиентам для модуляции метастатическая ниша и матриксные протеазы для облегчения клеточной инвазии [101,102,103,104].Вышеупомянутое семейство сигнальных молекул эфрина также было охарактеризовано как груз микровезикул [106,107]. Недавняя работа началась для определения роли внеклеточных пузырьков в переносе Wnts.

Из-за своей липидной модификации лиганды Wnt являются высокогидрофобными и традиционно считаются действующими как сигнальные молекулы ближнего действия [3], ограничивая их активность в соседних клетках, чтобы регулировать их мощные эффекты. Wnts обладают сильным сродством к мембранам и внеклеточному матриксу, с особым сродством к протеогликанам сульфата гепарина [108,109,110,111].Эти эффекты передачи сигналов на короткие расстояния Wnts были хорошо описаны в литературе, идентифицируя важные механизмы, которые ограничивают передачу сигналов в соседние клетки во время определенных клеточных процессов [3,112,113]. Накапливаются доказательства того, что Wnts или расположенные ниже мишени Wnt также могут быть модифицированы или упакованы во внеклеточные везикулы для облегчения дальнейшего распределения, изменения образования градиента или иной модуляции передачи сигналов [13,114,115,116,117,118,119,120,121,122,123,124]. Например, появились доказательства того, что модификации, которые защищают гидрофобные фрагменты, могут функционировать как белки-носители для облегчения передачи сигналов на большие расстояния.У Drosophila липопротеиновая модификация Wnt гомолога Wingless (Wg) и его упаковка в «аргосомы», как было показано, необходимы для его передачи сигналов на большие расстояния [118]. Кроме того, Wg-взаимодействующие липопротеины Secretedless-Intecting Molecule (SWIM), как было установлено, способствуют растворимости Wg у мух, что важно для нормального развития крыльев [123]. Сходным образом было показано, что Wnt3a млекопитающих ассоциирован с липопротеидными частицами [122]. Wnts были охарактеризованы как груз во внеклеточных пузырьках, включая экзосомы и микровезикулы [114,115,116,117,119,120], что может регулировать их доступность в качестве лиганда.В определенных контекстах упаковка Wnts в пузырьки все еще может обеспечивать передачу на короткие расстояния, такие как та, которая была продемонстрирована при синаптической передаче в нервной системе Drosophila [115]. В контексте обновления стволовых клеток загрузка Wnt3 в микровезикулы, происходящие из эмбриональных стволовых клеток, наряду с комплементом др. Белков и нуклеиновых кислот, как было показано, способствует выживанию и пролиферации гематопоэтических клеток-предшественников [119]. Было продемонстрировано, что экзосомы могут функционировать для удаления β-catenin из клеток, действуя как механизм подавления передачи сигналов ниже активации Wnt [121], а β-catenin был охарактеризован в экзосомах, происходящих из клеток рака толстой кишки [106].Еще одно исследование показало, что ассоциированные с карциномой фибробласты выделяют внеклеточные пузырьки, которые стимулируют подвижность и метастазирование клеток рака молочной железы (BCC), мобилизуя неканонический путь Wnt / PCP в BCCs [116]. Везикулы, происходящие из фибробластов, функционируют как носитель для связывания продуцируемого BCC Wnt11 и облегчают аутокринную передачу сигналов Wnt11 в BCC. Т.о., как появляющаяся платформа передачи сигналов, внеклеточные пузырьки могут играть важную роль в облегчении секреции, транспорта и дистальной передачи сигналов Wnt.

5. Заключительные замечания и перспективы

Учитывая, что передача сигналов Wnt очень влияет на регуляцию передачи сигналов GTPase в различных формах нормального развития и поддержании гомеостатической ткани [27,31,58,59], а передача сигналов Wnt часто связана с способствуя прогрессированию опухолей [13,22,30,31], возможность того, что канонические и неканонические сигнальные каскады Wnt могут модулировать управляемую GTPase пластичность, которую клетки используют для вторжения в различные среды, заслуживает дальнейшего изучения.Стимуляция Wnt может предоставить дополнительные средства для управления процессами тканевой инвазии путем специфического воздействия на ключевые GTPases и / или их эффекторы.

Хотя это в значительной степени не изучено на сегодняшний день, возможно, что передача Wnts на большие расстояния, особенно во внеклеточных пузырьках, может играть роль в развитии и прогрессировании заболевания. Хотя экзосомы и микровезикулы формируются нормальными клетками, их образование часто активируется при болезненных состояниях, включая рак [101,102,104].Как было замечено в случае связанных с раком фибробластов, способствующих прогрессированию рака молочной железы за счет высвобождения экзосом, которые модулируют передачу сигналов Wnt-PCP [116], внеклеточные везикулы могут служить платформами для распространения белков Wnt и активировать канонические или неканонические пути в клетках-мишенях. В процессе развития строго регулируемая структура градиентов Wnt важна для ограничения стимуляции Wnt изолированными клетками или группами клеток [13], и в некоторых случаях распределение лигандов Wnt по всей развивающейся ткани может не требоваться для всего формирования тканевого паттерна. и развитие [125].В случае рака, однако, нарушение регуляции высвобождения Wnt, которое позволяет транслировать лиганд на большие площади, может быть использовано для стимулирования пролиферации и подвижности клеток в опухолях или группах подвижных клеток, а также потенциально кондиционирует микросреду перед инвазией и колонизация. Wnt3a, как было показано, действует как хемотаксический агент, рекрутируя клетки в тестах с трансвелл, эффект, который отличается от простого усиления подвижности [69]. Примеры, подобные этому, повышают вероятность того, что отложение Wnt внеклеточными пузырьками может способствовать направленному движению клеток.

Отложение протеазы из инвазивных клеток является важным медиатором клеточной инвазии, которая может осуществляться за счет высвобождения микровезикул, нагруженных протеазой [57,101,102], и активации матричной металлопротеиназы (ММР). MMPs активируются в ответ на стимуляцию Wnt во время развития и тканевого гомеостаза [125,126,127,128], необходимых для ремоделирования тканей, миграции клеток и расщепления онтогенетических регуляторных молекул, чтобы опосредовать их активацию [129]. Повышенная экспрессия MMP также часто отмечается при стимуляции Wnt при инвазии опухолевых клеток, включая MMP-2 [49], MMP-7 [130], MMP-9 [131], MMP14 [132] и MMP16 [133].Хотя в настоящее время не исследована, возможность увеличения экспрессии протеазы и ее высвобождения во внеклеточных пузырьках из инвазивных опухолевых клеток в ответ на стимуляцию Wnt — это область, которая заслуживает дальнейшего изучения. Наконец, биомедицинское сообщество признает, что внеклеточные везикулы представляют собой потенциально новые возможности для адресной доставки индивидуализированного груза во время болезни. Эти типы исследовательских усилий не только будут способствовать пониманию передачи сигналов Wnt, опосредованной пузырьками, но также будут способствовать исследованию их роли в передаче других морфогенов и сигнальных молекул, тем самым делая важные выводы о биологии передачи сигналов Wnt и, в конечном итоге, в стратегиях. для вмешательства в лечение заболеваний, связанных с Wnt.

Ввод заметок и рисование в OneNote для Windows 10

С OneNote для Windows 10 вы можете писать заметки от руки, а также рисовать или набрасывать объекты в записной книжке. Это особенно хорошо работает на устройствах с сенсорным экраном, но вы также можете рисовать с помощью мыши. Новый набор перьев можно настраивать и переносить. Вы определяете нужные ручки, карандаши и маркеры, и затем они становятся доступными в OneNote, Word, Excel и PowerPoint.

Для начала в меню Draw коснитесь Рисование мышью или касанием .

Выберите чернила

1. Чтобы изменить ширину пера, выберите тонкую или среднюю форму пера в меню Draw .

2. Чтобы изменить цвет пера, коснитесь Цвет чернил и коснитесь одного из доступных цветов.

Удаление росчерков

1. Чтобы стереть то, что вы нарисовали, нажмите Ластик и выберите один из следующих вариантов:

Выбрать росчерки

Преобразовать рукописный текст в текст

OneNote включает удобный инструмент преобразования, позволяющий преобразовывать рукописный текст в печатный.Он даже сохранит размер и цвет ваших чернил, а также блики и эффекты.

1. На вкладке Draw нажмите Lasso Select .

2. На странице обведите рукописный текст, который нужно преобразовать.

3. На вкладке Draw нажмите Ink to Text .

Рисование точных форм

1. Чтобы нарисовать фигуру, которую OneNote автоматически очищает, нажмите Преобразовать в фигуры в меню Draw .

2. Нарисуйте фигуру, например круг, треугольник или прямоугольник.

   Нарисованная от руки фигура превращается в фигуру с прямыми линиями или чистыми углами.

Вернуться к вводу

Панорамирование и масштабирование при рисовании

• Чтобы выйти из режима рисования, чтобы можно было панорамировать и масштабировать, коснитесь Выбрать объекты или Введите текст .

  Выберите одно из следующего:

  • Чтобы увеличить или уменьшить масштаб, сведите и растяните экран двумя пальцами.

  • Для прокрутки проведите одним пальцем вверх и вниз.

  • Для панорамирования проведите одним пальцем влево и вправо.

  • Когда вы закончите, нажмите Нарисовать , чтобы нарисовать снова.

Репродуктивная токсикология — Журнал — Elsevier

Опираясь на большое количество дисциплин, Репродуктивная токсикология публикует своевременные оригинальные исследования влияния химических и физических агентов на репродуктивную способность . Написано акушерами, педиатрами, эмбриологами, тератологами, генетиками, токсикологами, андрологами и другими и для них …

Читать далее

Опираясь на большое количество дисциплин, Репродуктивная токсикология публикует своевременные оригинальные исследования влияния химических и физических агентов на репродуктивную способность .Написанный акушерами, педиатрами, эмбриологами, тератологами, генетиками, токсикологами, андрологами и другими, заинтересованными в обнаружении потенциальных репродуктивных опасностей , и для них, журнал является форумом для общения между исследователями и практиками. Статьи посвящены применению in vitro , исследованиям на животных и клиническим исследованиям в практике клинической медицины.

Все аспекты воспроизводства входят в сферу действия Репродуктивной токсикологии , включая формирование и созревание мужских и женских гамет, половую функцию , события, связанные с слиянием гамет и развитием оплодотворенной яйцеклетки, питание и транспортировку концепции в половых путях, имплантации, эмбриогенез , внутриутробного роста , плацентации и функции плаценты, родов , лактации и выживаемости новорожденных.Неблагоприятные репродуктивные эффекты у мужчин будут считаться такими же значительными, как и у женщин. Чтобы обеспечить сбалансированное представление подходов, равное внимание будет уделяться клинической работе и работе на животных или работе in vitro . Типичные конечные точки, которые будут изучены участниками, включают бесплодие, сексуальную дисфункцию, самопроизвольный аборт, пороки развития, аномальный гистогенез, мертворождение, задержку внутриутробного развития, недоношенность, поведенческие аномалии и перинатальную смертность.

Помимо оригинальных исследовательских статей, Reproductive Toxicology также публикует интерпретирующие обзорные статьи, редакционные статьи, письма, обзоры книг и объявления на конференциях. Первый раздел каждого номера журнала посвящен углубленному и своевременному анализу исследований по влиянию конкретных химических или физических агентов на репродуктивную функцию. Потенциальным авторам рекомендуется связаться с главным редактором перед отправкой такого обзора.

Скрыть полную цель и объем Аудио

: новые данные свидетельствуют о том, что вакцины против COVID-19 остаются эффективными против вариантов

Появление новых и более заразных вариантов коронавируса подняло тревожный вопрос: сможет ли нынешний урожай вакцины COVID-19 предотвратить эти варианты от заражения?

Исследование, опубликованное в среду в журнале Nature , предполагает, что ответ — да.

Исследование было довольно простым. Ученые взяли кровь у добровольцев, получивших вакцину Johnson & Johnson от COVID-19, и посмотрели на уровни нейтрализующих антител, которые предотвращают проникновение вируса в клетки.

«Мы показали, что нейтрализующие антитела уменьшаются примерно в пять раз по сравнению с вариантом B.1.351», — говорит Дэн Баруш, директор Центра вирусологии и исследований вакцин медицинского центра Beth Israel Deaconess в Бостоне.Согласно новой номенклатуре, предложенной Всемирной организацией здравоохранения, B.1.351 теперь называется Beta. Впервые он появился в Южной Африке.

«Это очень похоже на то, что другие исследователи показали с другими вакцинами», — говорит он. «Но мы также показали, что существует множество других типов иммунных ответов, помимо нейтрализующих антител, включая связывающие антитела, функциональные антитела FC и ответы Т-клеток».

И это последний иммунный ответ, Т-клеточный ответ, который, по словам Баруша, является критически важным.Потому что Т-клетки, особенно Т-лимфоциты CD8, играют решающую роль в предотвращении болезней.

«Это Т-клетки-убийцы», — говорит Баруш. «Это те типы Т-клеток, которые могут в основном искать и уничтожать инфицированные клетки и напрямую помогать избавляться от инфекции».

Они не предотвращают заражение; они помогают предотвратить распространение инфекции.

«Ответы Т-клеток на самом деле не сводятся — вообще — к вариантам», — говорит Баруш. Это не только вариант Beta, но также варианты Alpha и Gamma.

Это может помочь объяснить, почему вакцина Johnson & Johnson предотвратила серьезное заболевание при испытании на добровольцах в Южной Африке, где распространены вызывающие беспокойство варианты.

«Данные очень надежные, — говорит Алессандро Сетте, иммунолог из Института иммунологии Ла-Хойи. «Данные Дэна Баруча действительно очень хорошо показывают, что нет заметного снижения реактивности [CD8 Т-клеток]».

Лаборатория

Сетте показала аналогичные результаты с вакцинами Pfizer-BioNTech и Moderna COVID-19.Так же поступила и Марсела Маус из Массачусетской больницы общего профиля. Хотя потребуются исследования на людях, чтобы убедиться, что вакцины будут работать против вариантов, «все, что генерирует Т-клеточный иммунный ответ на SARS-CoV-2, я бы сказал, имеет многообещающий потенциал защиты», — говорит Маус.

Что еще не ясно, так это то, как долго будет длиться Т-клеточный ответ, но несколько лабораторий работают над ответом на этот вопрос.

Авторское право 2021 NPR. Чтобы узнать больше, посетите https://www.npr.org. .